Виноград преображение отзывы форум: описание сорта, фото, отзывы садоводов, видео

By alexxlab No comments

Содержание

отзывы, фото, описание сорта, посадка и уход, выращивание, обрезка

Преображение — относительно молодой сорт винограда. Однако уже успел стать популярным среди многих дачников: и профессионалов, и любителей. Поспевает в кратчайшие сроки, дает плоды крупные, постоянный урожай и совсем неприхотлив в уходе.

История селекции сорта

Преображение является гибридом Кишмиша лучистого и Талисмана. Создатель сорта — селекционер Крайнов В.Н. из г. Новочеркасска. Созданные им сорта и гибриды отличаются высокими показателями урожайности (Виктор, Юбилей).

Новый гибрид винограда Преображение пока на испытательном селекционном этапе и не входит в официальный государственный реестр. Тем не менее его уже выращивают на своих участках как для частного, подсобного хозяйства, так и в промышленных масштабах на территории всей страны.

Виноград Преображение — фото

Описание винограда Преображение

Преображение — высокорослый сорт винограда, образующий огромное количество пасынков. Лоза виноградника вызревает наполовину длины побега. Цветки мужского и женского пола, поэтому проблем с опылением у винограда Преображение нет.

Виноградины крупного размера, продолговатой, овальной формы. Длина может достигать от 5-ти до 6-ти см. В некоторых случаях можно встретить и более крупные экземпляры, размером с коробок для спичек. Масса плодов различна, находится в пределах от 12-ти до 30-ти гр.

Фото винограда Преображение

Окрас виноградин значительно меняется в зависимости от условий климата. Чаще всего встречаются плоды нежного, светло-розового оттенка. Иногда можно увидеть и желтоватый оттенок на ягодах. Когда растению достаточно солнечного света, грозди становятся насыщенного, яркого красного цвета. Недостаточность солнечного света приводит к бледности созревших плодов. Внутри находится сочная, кисло-сладкая мякоть. Горчинка во вкусе отсутствует. Кожура настолько тонкая, что даже не ощущается при употреблении плодов.

Внимание! Не рекомендуется допускать перегруженности лозы гроздями, так как в этом случае плоды потеряют всю палитру вкуса, став пресными и содержащими большое количество воды.




Характеристика винограда Преображение

Гибрид Преображение создан для выращивания в южной и средней широтах страны. Для роста и развития идеально подходит южный и умеренный климат.

Среди главных характеристик сорта Преображение: устойчивость к погодным условиям, уровень урожайности, использование плодов, иммунитет, достоинства и недостатки сорта.

Виноград Преображение — видео

Виноград Преображение: морозостойкость и засухоустойчивость

Находится на среднем уровне, что означает способность прекрасно выдерживать морозы до 23 градусов ниже 0, судя по описанию гибрида на упаковке. Однако некоторые отзывы говорят о том, что даже при температуре в – 18 градусов виноград Преображение может погибнуть.

Устойчивость к засухе средняя.

Урожайность сорта винограда Преображение

Для полноценного формирования и созревания спелых плодов винограда необходим промежуток времени от 100 до 115-ти дней. На юге сбор проводят уже в последних числах июля. Когда уход за виноградом Преображение организован и проводится правильно, с одного кустарника можно получить урожай в размере от 20-ти до 25-ти кг спелых ягод.

На заметку! Собирать стоит только спелые плоды. Определить спелость ягод достаточно легко: необходимо немного сжать виноградину с обеих сторон. Если это происходит легко, плод не трескается, значит, урожай поспел и готов к сбору.

Область применения плодов

Плоды гибрида Преображение применяют в необработанном виде, то есть в сыром. Также из виноградин делают вина высокого качества, изюм.

Плоды отлично переносят транспортировку на абсолютно разные расстояния, сохраняя красивый, свежий вид еще длительное время, а также – отменные вкусовые качества. Хранить виноград рекомендуют в прохладном помещении, оборудованном хорошей вентиляцией.

Устойчивость винограда Преображение к болезням и вредителям

Самая огромная проблема для виноградников – осы, которых привлекают ягоды из-за содержания в них большого количества сахара. Они способны нанести значительный урон урожаю, ухудшая в том числе и внешний вид плодов.

Еще одна проблема для винограда – подушечницы и блошки. Первые потребляют сок винограда, а вторые – листья.

Гибрид Преображение имеет средний иммунитет, соответственно и устойчивость к заболеваниям на этом же уровне. Чаще всего поражается мучнистой росой, раком, некрозом (пятнистым).

Достоинства и недостатки сорта

Так как гибрид еще молодой, выявление сильных и слабых сторон находится еще в процессе.

На сегодняшний день можно выделить следующие преимущества винограда Преображение:

  1. крупный размер виноградин;
  2. прекрасная транспортабельность;
  3. красивый вид ягод, что особенно важно при выращивании винограда в коммерческих целях;
  4. раннее созревание;
  5. постоянная урожайность;
  6. высокая цена;
  7. отсутствие горечи во вкусе;
  8. простота в уходе;
  9. нетребовательность к качеству, составу почвы.

Из недостатков у сорта Преображение можно выделить:

  • жирование виноградной лозы;
  • средний уровень стойкости к низким температурам;
  • необходимость зимнего укрытия;
  • потребность в систематической обрезке;
  • снижение качества вкуса в случае перегруженности лозы;
  • средняя устойчивость к болезням;
  • подверженность нападению насекомых.

Далее поговорим о том, как правильно посадить и вырастить гибрид.

Виноград Преображение: агротехника выращивания

Уже было сказано о неприхотливости Преображения по отношению к почве. Прекрасно приживается и быстро адаптируется в любом грунте. Однако стоит обязательно защитить посадку от сильных ветров и не располагать вблизи с крупного размера кустарниками и прочими деревьями.

Выбор и подготовка саженцев винограда к посадке

Подходящим временем для посадки сорта Преображение является середина апреля. Грунт уже достаточно прогрет к этому моменту, а корням достаточно времени, чтобы хорошо прижиться на новом месте до появления первых заморозков.




Подготовка саженцев винограда Преображение для посадки является важным этапом процесса. Стоит покупать саженцы в специализированных магазинах. При покупке нужно обращать внимание на состояние корней и наличие повреждений на коре. Корневая система здорового саженца имеет белый цвет. Срез должен быть зеленым.

Для лучшей приживаемости на месте посадки опытные овощеводы настоятельно советуют замачивать саженцы на пару дней в теплой воде, добавив предварительно стимулятор роста корней, например, «Корневин».

Как проходит посадка винограда Преображение будет описано далее.

Посадка винограда Преображение

Сначала нужно как следует перекопать почву на участке, после чего сделать лунку глубиной в половину метра. Необходимо соблюдать дистанцию между посадками, не меньше метра. Самое подходящее расстояние составляет от 2-х до 3-х метров между кустарниками.

На дно лунки насыпают смесь в несколько последовательных слоев:

  • Первый слой, высотой в 25 см, состоит из смеси перегноя и питательного грунта. Уплотняют слой.
  • Второй слой составляет от 8-ми до 10-ти см с обязательным применением неорганического удобрения. В состав входит 300 гр суперфосфата, калий, древесный уголь (в размере 3-х литров). Все тщательно смешивают с основным грунтом.
  • Третий слой в 5 см, уже без внесения подкормок.
  • Представленный выше вариант заполнения посадочной ямы только один из возможных. Необязательно применять именно его.
  • Саженцы располагают так, чтобы шейка корня была на 3-4 см над землей. Остальные части корня должны быть хорошо засыпаны грунтом.
  • После посадки саженца землю вокруг него уплотняют и увлажняют.

Посадка винограда

Последующий уход за виноградом Преображение

Гибрид не относится к капризным культурам. Ему нужен только своевременный полив, подкормка и обрезка. Это основные процедуры по уходу.

Как поливать виноград

Полив требуется умеренный. Только что высаженные молодые деревца поливают 1 раз в неделю. На каждый куст уходит около 20-ти литров воды. Спустя 30 дней полив сокращают до раза в месяц, а количество воды увеличивают в 2 раза, то есть до 40 литров на растение.

Подкормка винограда Преображение

Удобрение вносят несколько раз в сезон.

В весенний период проводят подкормку винограда Преображение либо селитрой (с содержанием аммиака), либо мочевиной.

Осенью виноградным кустарникам требуются минеральные подкормки с фосфором в составе, медь. Последняя способствует повышению устойчивости к морозам.


Обрезка винограда Преображение

Обрезку винограда Преображение делают осенью или весной

Весной обрезку проводят до распускания почек. При обрезке оставляют не больше 28-ми побегов на каждом кустарнике.

Как проводить обрезку и подвязку винограда Преображение — видео

Обрезка Винограда

Как бороться с вредителями и болезнями

Уже было отмечено в качестве слабых сторон данного гибрида – подверженность нападению насекомых. Среди них осы, подушечница, тля, трипсы и прочие.

Чтобы устранить непрошенных «гостей» натуральными средствами, применяют:

  • мыльный раствор;
  • воду с чесноком;
  • раствор с медным купоросом (4%).

Можно приобрести специальные средства для борьбы с вредителями в магазинах.

Борьба с болезнями и вредителями винограда — видео

Среди них:

  • Фитоверм.
  • Калипсо.
  • Интра-вир.

Гибрид Преображение отличается слабой устойчивостью к грибкам и бактериям. В качестве профилактики применяют фунгициды для винограда.

Среди них: Топаз, Витарос, Хорус и другие.

Как подготовить виноградник Преображение к зимовке

Преображение требует обязательного укрытия на время зимы. Побеги собирают в отдельные пучки и пригибают к земле, фиксируя, например, скобой из металла. Можно использовать шифер.

Подготовка винограда к зимовке — видео

Сверху делают мощный укрывной слой из лапника сосны, опавшей листвы, речного песка, опилок, сена. Есть специальный материал, предназначенный именно для укрытий растений на зимовку. Он хорошо пропускает воздух и является прекрасным вариантом укрытия.

Размножение винограда Преображение черенками

Существует два способа размножения данного сорта винограда: саженцами, черенками.

Выше по тексту подробно рассказано, что делать с саженцами винограда Преображение для посадки, как правильно подготовить, посадить, ухаживать. Теперь немного о втором виде размножения.

Размножение винограда черенками — видео

Черенки нарезают либо весной, либо осенью. На каждом должно присутствовать от двух до трех глазков. Важно, чтобы было расстояние от 3-х до 5-ти мм между глазками. Перед прививкой черенок располагают в воде комнатной температуры, предварительно добавив в нее биологический стимулятор роста.

Когда прививка происходит осенью, возникает необходимость повысить устойчивость к морозу. Для этого черенок опускают на пару секунд в разогретый парафин, а потом в прохладную воду.

На подвое делают надрез в виде буквы «Т». Черенок помещают в этот разрез, после чего защепляют кору и берут плотную ткань для обвязки место прививания. Стоит обработать надрез и место прививки варом, чтобы не допустить заражения. Повязку можно снимать только после образования первых листочков.

Виноград Преображение: отзывы о сорте тех, кто выращивает

Владимир, Московская область:
Выращиваю два года на своем дачном участке виноград Преображение. Чтобы виноградины были насыщенного цвета, необходимо выращивать деревья на хорошо освещаемом месте. Обязательно провожу профилактику, чтобы растения не болели, так как иммунитет недостаточно высокий, чтобы противостоять возбудителям самостоятельно без посторонних средств. Урожай хороший, второй год держится на одном уровне. Пока деревца небольшие, составляет 12 кг с одного растения. На зиму укрываю виноград Преображение материалом, который приобретаю в специализированном отделе.

Любовь, г. Волгоград:
Я отдала предпочтение «Преображению», потому что он дает хороший и, что немаловажно для меня, постоянный урожай. То есть со временем его не становится меньше, как обычно бывает с виноградными культурами. Выращивая данный гибрид, нужно внимательно следить за нагрузкой лозы, чтобы не допускать перегруза. Плоды на таких ветвях не годятся для употребления, на мой взгляд. Становятся безвкусными и водянистыми. Следить за нагруженностью лозы необходимо и в целях хорошей зимовки. Вообще с зимовкой приходится немного повозиться. В том числе и при выборе места посадки. Когда достаточно количества солнечного света, лоза созревает полноценно и может спокойно пережить зиму, сохранив целостность. Перед зимовкой требуется хорошо увлажнять грунт.

Виноград Преображение – хороший выбор и для начинающего, и для опытного садовода. Он прост в уходе, имеет постоянный уровень урожайности. Ягоды пригодны для употребления в свежем виде. Подходят и для переработки. Их можно выращивать и для личного подсобного хозяйства, и в коммерческих целях, на продажу.

Сорт винограда Преображение: фото, отзывы, описание, характеристики.

Выведение новых сортов винограда давно уже перестало быть исключительной прерогативой ученых научно-исследовательских учреждений. Любители-энтузиасты все чаще сами берутся осваивать ремесло селекционера с тем, чтобы обогатить сортовой фонд этого замечательного растения. Благодаря широчайшей вариативности свойств виноградной лозы, возможности ее гибридизации поистине безграничны, и результат этой работы зависит исключительно от вдохновения и настойчивости виноградаря-творца.

Одним из первопроходцев народной селекции в нашей стране можно считать Виктора Николаевича Крайнова из Новочеркасска. По его стопам пошли сотни последователей, для которых результативность работы Виктора Николаевича до сих пор остается ориентиром и примером для подражания. В активе Виктора Крайнова числится множество выведенных им новых гибридных форм, высоко оцененных в любительском виноградарстве, и даже востребованных в промышленном.

Одним из таких, нашедших постоянную прописку на приусадебных участках, гибридов является Преображение. Данная разновидность входит в так называемую «тройку Крайнова» — очень похожие между собой формы, выведенные в свое время оригинатором-любителем. Помимо Преображения, в этот же перечень входят такие сорта, как Виктор и Юбилей Новочеркасска. По внешним признакам все три разновидности похожи как две капли воды. Бытует мнение, что все они являются клонами одного гибрида, однако узнать, так это или нет, наверное не получится, их автора уже нет с нами.

Наш герой был получен на основе гибридизации двух известных и популярных сортов — Талисмана и Кишмиша лучистого. Бессемянного винограда от этого скрещивания не получилось, но даже с косточками новая форма производит впечатление размерами, окраской и красотой гроздей и ягод. Именно они стали ее визитной карточкой, предопределив восхищение и непроходящий интерес к ее выращиванию со стороны поклонников винограда. От Талисмана новый гибрид унаследовал выдающуюся крупноплодность, а от Кишмиша лучистого — нарядный розовый цвет ягод.

Кусты Преображения отличаются очень большой силой роста. Листья крупные, зеленые, среднерассеченные, пятилопастные. Верхние боковые вырезки открытые, глубокие. Нижние боковые открытые, едва намеченные. Черешковая выемка открытая, с параллельными сторонами и плоским дном. Цветки обоеполые, не требуют наличия опылителей.

Грозди у сорта очень крупные — от полутора до двух килограммов, некоторые достигают массы 3 кг. Они конические или цилиндроконические, иногда бесформенные. Плотность кистей средняя или рыхлая. Гребненожка прочная, зеленого цвета. Ягоды хорошо удерживаются на гребне ножками средней длины, сдавливания не наблюдается. Сами ягоды очень крупные, размером 36×24 мм и массой до 20 грамм, удлиненно-овальные, с легко съедаемой кожицей средней толщины, приятного розового цвета, покрытой белым слоем пруинового налета. Вкус у Преображения кисло-сладкий, гармоничный, без ярко-выраженных сортовых особенностей. Мякоть сочная, мясистая, средней плотности. Косточки присутствуют, но в ягодах такого крупного размера почти незаметны при употреблении. В случае перегрузки кустов урожаем, к которой склонен этот сильнорослый гибрид, отмечается снижение вкусовых качеств винограда вплоть до совершенно невыразительного водянистого состояния.

Урожай созревает очень рано — через 110−115 дней после начала вегетации, используется для потребления в свежем виде, пользуется большим интересом и спросом покупателей. Пригоден для перевозок на значительные расстояния. С учетом раннеспелости, виноград успевает вызреть в различных климатических условиях, а на самом юге, по некоторым оценкам, даже успевают получить второй урожай на пасынках. При этом сорт имеет специфическую особенность — самые интенсивно-окрашенные и эффектные по виду грозди вырастают в тени и в северных, не слишком избалованных солнцем регионах. По этой причине рекомендуется не слишком осветлять грозди на лозе, чтобы добиться наилучшей привлекательности ягод.

Плодоношение Преображения очень обильное. С куста можно собрать до двадцати килограммов ягод. Вызревание побегов удовлетворительное. Сахаристость винограда хорошая — 17−19%. Кислотность 6−8 грамм на кубический дециметр. По некоторым оценкам, грозди могут длительное время (на юге до октября) сохраняться на кусте, лишь слегка подвяливаясь, но и становясь от этого намного слаще, чем на момент съемной зрелости.

Агротехнические особенности сорта заключаются в средней, а по ряду свидетельств, и недостаточной морозостойкости, отсутствии устойчивости к болезням и вредителям, высоком пасынкообразовании, склонности к загущению и перегрузке. Для получения высокого по качеству урожая рекомендуется оставлять на побеге Преображения не больше одной грозди. Также дает хорошие результаты надщипывание нижней части кисти на одну четверть или треть. Проводить такую процедуру необходимо сразу после начала роста ягод, когда они еще не превышают по размеру горошинки.

В то же время, у данного гибрида отмечена хорошая укореняемость черенков и срастаемость с подвоями. Он быстро растет и вступает в плодоношение. Горошение на кистях наблюдается редко. К филлоксере виноград неустойчив, поэтому размножение черенками возможно только в зонах, свободных от этого вредителя. Осами ягоды повреждаются в средней степени.

В целом, Преображение можно считать очень изысканным, но в то же время достаточно нежным сортом. По большому счету, это проблема многих гибридов любительской селекции, где родительские формы выбираются зачастую с единственной задумкой — получить в результате уникальную в эстетическом отношении гроздь. Даже вкусовые качества отходят при этом на второй план, а уж агротехнические характеристики и вовсе порой остаются без внимания.

Преображение, к счастью, при действительно выдающихся показателях качества урожая нельзя назвать совсем уж тепличным виноградом, но необходимые агротехнические рекомендации должны выполняться очень ответственно и в полном объеме, начиная от посадки саженцев и выбора формы ведения куста, заканчивая уходом за взрослыми растениями в период плодоношения. Особое внимание стоит уделить оценке климатических условий в вашем регионе, наличию необходимости и возможности защиты лозы от повреждения морозами, серьезно подойти к обработке растений от вредителей и болезней. Также важно осуществлять правильное нормирование нагрузки, обрезку и проведение зеленых операций в целях недопущения перегрузки и чрезмерного загущения кустов. Преображение же, в свою очередь, обязательно по достоинству оценит усилия грамотного виноградаря, отблагодарив за уход потрясающим по красоте гроздей урожаем.

Виноград преображение отзывы

Виноград «Преображение»: характеристика и правила ухода

Категории: Виноград

Виноград «Преображение» относится к числу новых сортовВиноград «Преображение» относится к числу новых сортов, которые в настоящее время ещё не введены в Государственный реестр, однако пользуются повышенным интересом у профессиональных виноградарей и садоводов-любителей нашей страны.

Виноград: основная информация
  • Сорта: Настя, Эверест, Памяти Домбковской, Преображение, Фуршетный, Валек, Красотка, Марсело, Загадка Шарова, Румба, Памяти учителя, Валентина, Альфа, Девичий виноград, Чарли, Богатяновский, Блестящий, Пино Нуар, Пино, Анюта, Ася, Лора, Циссус, Сира, София, Лидия, Бажена, Подарок Запорожью, Антон Великий, Алекса, Плевен, Надежда АЗОС, Монарх, Белое чудо, Мускат, Дамские пальчики
  • Типичные проблемы: Опоры, Арка, Виноград весной, Обработка, Виноград осенью, Саженцы, Выбор
  • Особенности ухода: Уход, Подвязка, Обрезка, Выбор сорта, Свойства, Тапенер, Прививка
  • Род растения: Виноградовые
  • Тип: Покрытосеменные растения
  • Класс: Двудольные
  • Количество родов: 14
  • Количество видов: более 900
  • Все вопросы о винограде
  • Все статьи о винограде
  • Задать вопрос бесплатно
Фото:

Характеристика сорта

Виноград «Преображение» выведен селекционером-любителем В.Н. Крайновым, и является сложным межвидовым гибридом с очень ранним сроком созревания. Длительность периода созревания от распускания глазков до полной зрелости ягод может варьироваться от 100 до 115 дней в зависимости от погодных факторов и региона культивирования.

Биологическое описание

Межвидовой гибрид винограда «Преображение» в корнесобственной и привитой культурах характеризуется сильным ростом. Кроме того, наблюдается очень высокая пасынкообразовательная способность материнских виноградных кустов. На пасынках формируется дополнительный урожай ягод.

Виноград «Преображение» формирует ягоды очень красивые, достаточно выравненные и крупные

Цветки обоеполые, что позволяет рассчитывать на высокую самоопыляемость. Виноградные кисти имеют коническую форму или обладают некоторой бесформенностью. Структура кисти характеризуется средней плотностью, иногда рыхлостью. Стандартная масса каждой грозди может в значительной степени варьироваться от 0,7 кг до 2,5 кг.

Техническая характеристика

Виноград «Преображение» формирует ягоды очень красивые, достаточно выравненные и крупные. Форма ягоды удлиненно-овальная, длинной до 5 см. Средний вес полностью вызревшей ягоды может варьироваться от 18 г до 20 г. Окрашивание средней по толщине кожицы розовое. Мякоть сочная, достаточно мясистая, с приятным и гармоничным вкусом. Сахаристость виноградного сока в ягодах 17-19 г/100 см3 при кислотности в 6-7 г/дм3.

Виноград «Преображение» имеет обоеполые цветки, что позволяет рассчитывать на высокую самоопыляемость

Достоинства и недостатки

Межвидовая гибридная форма «Преображение» ещё не полностью прошла испытания, поэтому достаточно рано говорить о характерных достоинствах или недостатках этого винограда. Однако, исходя из заявленных характеристик, можно получить следующие сведения:

  • побеги вызревают удовлетворительно;
  • высокая совместимость с любыми видами подвоев;
  • урожайность данной гибридной формы очень стабильная;
  • показатели устойчивости к основным грибковым болезням составляют 3,5-4,0 балла;
  • отсутствие горошения вне зависимости от погодных условий, а также качественного состава почвы на участке выращивания;
  • виноград неустойчив к морозам в зимний период, а показатели морозоустойчивости не превышают -18оС;
  • транспортабельность и показатели товарности виноградных кистей очень высокие.

Можно отметить определённую перспективность данного винограда, что делает его год от года всё более популярным в кругу не только опытных виноградарей, но и садоводов-любителей. Средние показатели урожайности с каждого виноградного куста достигают 20 кг.

Виноград «Преображение»: выращивание и уход (видео)

Правила посадки

Гибридная форма «Преображение» выращивается виноградарями достаточно активно. Чтобы получить достойный урожай следует осуществить правильную посадку приобретённых саженцев:

  • саженцы не должны иметь каких-либо повреждений, поражений болезнями, пересушенной или подмороженной корневой системы;
  • самым подходящим временем для посадки является весна, когда почва достаточно прогрета после зимы;
  • глубина и диаметр посадочной ямы должны соответствовать размерам корневой системы с учётом незначительного возвышения прикорневой шейки саженца над уровнем грунта;
  • перед посадкой корневую систему саженца следует замочить в воде с добавлением специальных стимуляторов роста.

После высадки саженца грунт вокруг корневой системы следует обильно полить водой и прикрыть мульчей для получения парникового эффекта, что ускорит период адаптации растения к условиям культивирования.

Чтобы получить достойный урожай следует осуществить правильную посадку саженцев винограда

Особенности ухода

При выращивании винограда «Преображение» особое значение приобретает соблюдение агротехники:

  • требуется обязательное укрытие виноградных кустов на зимний период с предварительной обрезкой лозы на 3/4;
  • ежегодное осуществление подрезки с тем, чтобы каждый виноградный куст имел не больше 35 побегов;
  • грозди формируются достаточно объёмные и увесистые, что требует нормирования каждого побега до 1 или 2 завязей;
  • регулярные и достаточно обильные поливы целесообразно совмещать с проведением подкормок;
  • трёхкратное опрыскивание за вегетационный период кустов фунгицидами с целью профилактики от поражения грибковыми заболеваниями.

Основные мероприятия могут быть дополнены исходя из условий и региона культивирования данной гибридной формы.

Мы вам также предлагаем узнать об особенностях винограда «Фуршетный».

Межвидовая гибридная форма винограда «Преображение» уже обрела заслуженную востребованность и популярность

Отзывы садоводов

Межвидовая гибридная форма винограда «Преображение» уже обрела заслуженную востребованность и популярность, которая в последнее время растёт в геометрической прогрессии. Такой интерес к гибриду вызван не только очень ранним сроком вызревания урожая, а также большими размерами виноградных кистей, но и необычайно красивыми и вкусными ягодами.

Многие виноградари уже успели заметить некоторое сходство данного гибрида по вкусовым качествам и внешним показателям с сортами от селекционера-любителя В.Н. Крайнова под названиями «Виктор» и «Юбилей Новочеркасска». Однако именно гибрид «Преображение» в течение одного сезона при соблюдении агротехники способен сформировать два урожая, за что и высоко оценён садоводами, которые выращивают ягоды на реализацию.

Как обрезать виноград (видео)

DachaDecor.ru

Сорта винограда

Виноград Преображение, описание сорта, фото

автор фото Сергей Дандык

Этот сорт (селекции Крайнова) относится к ранним сортам винограда. Срок созревания 115-120 дней. Кусты мощные, обладают высокой интенсивностью роста и хорошо вызревающими побегами. Сорт склонен к жированию.

Отдельные грозди Преображения могут весить до 2,5 кг, но чаще всего каждая от 700 до 1,5 кг. Форма грозди коническая или цилиндроконическая, ягоды в ней удлиненно овальные, розового цвета, массой 15-20 г каждая и длиной до 5,5 см. Ягоды хоть и сочные, мясистые, но на вкус простые сладкие, без изысков. Кожица съедаемая. Если гроздь находится на открытом солнце, то ягоды могут не окраситься. Пасынковый урожай всегда более яркой окраски.

Сорт винограда Преображение ценится за стабильно высокую урожайность, высокие товарные качества и хорошую транспортабельность. Из-за своих красивых форм служит прекрасным украшением праздничных столов.

Устойчивость к болезням у этого сорта средняя.

Предпочтительна обрезка на 8-12 почек.

Виноград Преображение имеет хорошую совместимость с подвоями, черенки легко укореняются. К морозу не устойчив, требуется обязательное укрытие кустов на зиму.

Виноград Кодрянка

Это ранний столовый сорт винограда, срок созревания 110-120 дней. Куст сильнорослый, грозди винограда до 1,5 кг, но обычно 400-600 г. Ягоды крупные, темно-фиолетового цвета, каждая по 6-8 г, до 3-х см в длину. Вкусовые качества хорошие, ягода сладкая, но без изысков.

У сорта Кодрянка в неблагоприятные по погоде годы есть сильная склонность к горошению.

Из плюсов: обладает очень хорошим свойством — поздним пробуждением, что позволяет ему практически всегда уходить от весенних заморозков.

Сорт ценится за высокую урожайность и устойчивость к болезням. Кодрянку в основном выращивают из-за шикарного внешнего вида грозди. Сорт рыночный.

Предпочтительна обрезка на 7-8 почек.

Виноград Кодрянка начинает плодоносить на второй год, но хороший урожай дает только на третий год.

Виноград Лора

фото Евгения Полянина

Очень ранний сорт, период созревания 110-115 дней. По отзывам опытных виноградарей считается лучшим летним сортом винограда. Лору также считают чемпионом по сладости.

Кусты среднерослые, зато кисти на нем все практически одного размера, ширококонической и цилиндроконической формы. Каждая по 600-800 г, иногда до 1,3 кг. На хорошем подвое до 2,5 кг (совместимость с подвоями хорошая).

Опыляемость сорта хорошая.

Ягоды на кисти овальной формы, молочно-белые. Если гроздь на открытом солнце, то них появляется коричневый загар. Ягоды крупные, каждая весом 7-9 г и длиной до 3 см. Вкус приятный, гармоничный, мякоть плотная, хрустящая, кожица тонкая, съедаемая.

Сорт винограда Лора ценится за высокую урожайность, хорошую устойчивость к болезням, не склонность к горошению, устойчивость к морозам (до -23 градусов).

Плодоносить начинает на 2-3 год.

Этот сорт рекомендуется новичкам, так как довольно неприхотлив, прощает многие ошибки агротехники.

Виноград Ливия

фото Евгения Полянина

Сорт винограда сверхраннего срока созревания, от начала распускания почек до съемной зрелости ягод проходит 105 — 110 дней.

Сильнорослый куст, на нем большие грозди цилиндрической формы (до 1 кг), длиной порядка 25 см, но некоторые грозди ветвистые. Ягоды в грозди розовые, овальной формы, длина каждой до 3 см, ширина до 2 см, мякоть сочная, мясистая, с нежным мускатным ароматом. Кожица тонкая, съедаемая. В ягодах всего 1-3 семени, они легко отделяются от мякоти. Предпочтительна обрезка на 2-6 почек.

Недостаток сорта — слабая устойчивость к оидиуму, требуется профилактическая обработка фунгицидами.

Достоинства сорта: прекрасный вкус, хороший товарный вид, высокая урожайность. Сорт винограда Ливия — лидер продаж!

Виноград Виктор

автор фото Вопилов В.Г.

Сорт (селекции Крайнова) относится к ранним сортам винограда, период созревания всего 100-110 дней.

Куст сильнорослый, грозди на нем крупные, по 0,5-1 кг каждая. Ягоды розового цвета, крупные, длинные с заостренным кончиком, вес каждой до 15 г. Вкус ягод приятный, гармоничный, мякоть мясистая, сочная.

Сорт Виктор устойчив к болезням.

Из достоинств: урожайный, имеет прекрасный товарный вид, нет горошения, трансортабельный.

Виноград Аркадия

фото Евгения Полянина

Столовый сорт винограда раннего срока созревания.

Куст сильнорослый с крупными гроздьями, порой до 2 кг каждая (при хорошем уходе), обычно до 1 кг. Ягоды в грозди крупные, сердцевидной формы, по 10 г (иногда до 15 г) каждая. Цвет винограда белый, при солнечном освещении — желтый. Вкус гармоничный, мускатный.

Сорт Аркадия средне устойчив к оидиуму и серой гнили. Желательно профилактическое опрыскивание. Горошения за ним не наблюдается. Он по праву считается лучшим летним рыночным сортом!

Сорт Аркадия — рекордсмен по урожайности — с одного куста возможно собрать до 50 кг ягод.

Сорт не морозоустойчив, поэтому обязательно следует укрывать на зиму.

Начинает плодоносить на 2-3-й год.

А какой виноград выращиваете вы? Какой сорт считаете самым вкусным? Какой виноград вкуснее: белый, красный или черный? Поделитесь пожалуйста вашим мнением в комментариях.

dizajn-sada.ru

Описание гибридной формы винограда «Преображение» — Агроному.com

На сегодняшний день выведено огромное количество сортов винограда и все они обладают теми или иными преимуществами, за что и получают любовь садоводов. Среди новых сортов, которые на данный момент пока не введены в государственный реестр сортов винограда, особенно выделяется «Преображение».

Большим преимуществом его является способность приносить хорошие и высокие урожаи не только по Южному региону, но на территориях с умеренным климатом. Как не странно, но авторство данного сорта винограда принадлежит селекционеру-любителю, хотя на сегодня сорт относится к десятке самых перспективных для выращивание на территории России, Украины и Белоруссии.

Виноград «Преображение» — способ преобразить свой участок

Этот виноград на самом деле и не считается сортом, а скорее является гибридной формой винограда, которая стоит на очереди к присвоению статуса отдельного сорта.

Несомненно, что вскоре такой статус виноград «Преображение» получит, поскольку его заслуженная популярность растет в геометрической прогрессии благодаря ранним срокам дозревания ягод, большим размерам гроздьев с необычайно вкусными ягодами. Стоит отметить некоторое сходство винограда «Преображение» по характеру внешнего вида и вкуса с творениями того же В. Крайнова — сортами «Юбилей Новочеркасска» и «Виктор».

Характеристика гроздьев и ягод винограда «Преображение»

Что-что, а гроздья данного винограда просто поражают своими размерами и весом. В частности, средние показатели веса одной грозди составляют около 1-го килограмма, однако максимальные показатели достигают 3 килограмм. Форма грозди обычно коническая или цилиндроконическая, но встречаются и бесформенные грозди. Ее плотность обычно средняя или рыхлая (больше характерно именно бесформенным гроздьям).

Но еще больше впечатляют размеры ягоды винограда «Преображение». Имея удлиненно-овальную форму, средний вес их равен 13,9 граммам. Максимальные значение веса ягоды составляют 20 грамм, что для винограда очень много.

Размеры средней ягоды составляют 3,6х2,4 сантиметра. Крупная ягоды данной формы винограда имеет розовый или желто-розовый цвет кожицы, которая практически не чувствуется при поедании, поскольку имеет тонкую структуру. Кожица также покрыта тонким восковым налетом, который имеет беловатый оттенок.

Их мякоть очень мясистая, в ней содержится большое количество сока. Также, в ее химический состав входит около 17-19 грамм сахаров на 100 кубических сантиметров мякоти. При этом, показатель кислотности составляет всего 6-7 грамм на 1 литр объема. Вкус винограда очень гармоничный: приятная сладость сочетается с легким оттенком кислинки. Также, только созревшему винограду характерен очень приятный аромат.

Предназначена данная форма винограда для столового употребления. Большое содержание сока и сахаристость мякоти обеспечивают хорошую пригодность винограда для виноделия. Также, он очень хорош для свежего употребления в пищу.

Урожайность винограда «Преображение» — на что стоит рассчитывать?

Виноград «Преображение» по истине один из самых урожайных. В умеренных климатических зонах этот виноград дает первый урожай с материнского куста еще в августе, а на пасынковых отростках гроздья дозревают примерно в середине октября.

Именно способность радовать вторым полноценным урожаем на пасынках отличает эту форму винограда от всех остальных. Средние показатели урожайности одного виноградного куста «Преображения» составляют 20 килограмм ягод. Урожайность очень стабильная.

Его куст способен вырастать до очень больших размеров как при прививании, так и на собственном корне. Куст имеет очень высокую способность к образованию побегов. Вызревают побеги очень хорошо. Опыление проходит самостоятельно, благодаря обоеполому цветку. Также, виноградный куст «Преображение» способен очень хорошо адаптироваться к новым условиям произрастания и новому климату.

Достоинства гибридного винограда «Преображение»

  • Данная форма имеет очень ранние сроки дозревания, поскольку вегетативный период его длится всего от 110 до 115 дней. При этом, зрелость ягод этого винограда очень легко определяется простым нажатием на нее — мягкость ягоды и является индикатором зрелость.
  • Позитивным качеством данного сорта является фактическое отсутствие горошения ягод при любых погодных условиях и качестве почвы.
  • Виноград преображение отличается высокой совместимостью с любыми сортами подвоев и высокой способностью черенков к укоренению. Таким образом, его размножение значительно облегчается.
  • Морозостойкость «Преображения» относительно высокая, древесина не повреждается при морозах в -23ºС.
  • Особенно ценной данная форма винограда считается благодаря товарности гроздьев и ягод, а также пригодности их к транспортировке на дальние расстояния.

Негативные стороны винограда «Преображение»

  • Несмотря на хорошую устойчивость перед низкими температурами, виноградный куст все равно требует ухода — перед наступлением морозов его нужно очень хорошо укрыть.
  • Очень часто может поражаться грибковыми болезнями, характерными виноградникам. Показатели устойчивости перед заболеваниями составляют всего 3,5-4 балла.

Также интересно прочитать про девичий виноград

Указания виноградарям к особенностям посадки винограда «Преображение»

Перед тем, как приступить к непосредственной посадке винограда «Преображение», важно ознакомиться с главными нюансами этого процесса, без учета которых невозможно вырастить хороший куст винограда.

  • К почве данная форма винограда не особенно привередлива. Однако, намного больших результатов в выращивании любого винограда можно добиться на плодородных черноземах.
  • Увлажненность почвы не должна быть чрезмерной, но и сухость также будет только вредить виноградному кусту. Важно подобрать оптимальный вариант, с минимальным уровнем залегания грунтовых вод на 1,5 метра.
  • Выбирая место для его посадки, важно учитывать мощность корневой системы виноградного куста, которая образуется со временем. Поэтому, по близости не должно быть больших деревьев или других растений, поскольку они будут конкурировать с виноградом за питательные вещества.
  • Место для посадки должно быть освещенным самым лучшим образом и не продуваться холодными ветрами с северной стороны. Таким образом, оптимальным вариантом будет южная сторона дома или другого строения на вашем участке.

Сроки и виды посадки винограда «Преображение»

Как и любое другое растение, данную форму винограда лучше всего высаживать весной.

Однако, хорошие результаты роста виноград может давать и при осенней посадке. Важно учитывать то, какую форму Вы выберете для его посадки. Ведь виноград можно высаживать как с помощью саженцев, так и через прививание черенков, вырезанных из лозы «Преображения», на подвои любых других сортов винограда.

В первом случае лучше подойдет весенний период времени, во втором — все будет зависеть от того, в каком состоянии находится черенок и подвой («черный» — состояние покоя, «зеленый» — уже распустившийся).

Как правильно провести посадку винограда «Преображение» с помощью саженца

Первым делом, нужно подобрать хороший саженец. Он должен быть:

  • Не подмерзшим и не засушенным, иначе он попросту не сможет прижиться, или же будет очень болезненно расти. Продуктивность такого саженца будет минимальной.
  • Цвет корневой системы саженца обязательно должен быть белым.
  • Поперечный срез должен быть зеленым. В противном случае саженец также будет не пригодным.

Ямы для посадки лучше выкапывать на расстоянии друг от друга в 1-1,5 метра. Глубина ямы должна быть больше корней саженца ровно в два раза.

Дело в том, что для улучшения плодородности почвы, на дно выкопанной ямы обязательно нужно положить плодородную почву, перемешанную с органикой (упревшим перегноем или просто гноем). Сверху эта смесь еще должна покрыться слоем почвы, без удобрения. Таким образом, выкопав яму, мы еще засыпаем ровно на половину удобрениями.

Далее опускаем в яму саженец таким образом, чтобы его корневая шейка никоим образом не была ниже уровня почвы. Саженец должен быть уже подготовленным — вымоченным в воде на протяжении суток и обработанный стимулятором роста корневой системы (препарат «Гумат»).

Перед тем, как опустить его в яму, важно немного обрезать кончики корней с помощью секатора. Яма плотно закапывается и обильно поливается. Для полива можно использовать около 3-х ведер воды.

Посадка винограда «Преображение» с помощью черенков

Мы уже упоминали, что прививать черенки можно как «зелеными», так «черными». Кроме того, прививка осуществляется как на уже распустившийся подвой, так и ранней весной на еще спящий. Но, в любом случае, как черенки, так и подвой важно преждевременно подготовить.

Черенки должны быть с 2-3 глазками, чего будет достаточно для хорошего роста. У основания их нужно обрезать, оставляя до самого нижнего глазка расстояние всего в несколько миллиметров.

Обрезать его нужно в форме клина с двух сторон. Перед прививкой черенок должен постоять в воде на протяжении нескольких дней, а также его нужно вымочить в растворе «Гумата» (используется только раствор из 10 капель на 1 литр воды).

При осеннем прививании винограда черенок важно запарафинировать, чтобы в нем лучше сохранялась влага и чтобы повысить устойчивость перед морозами. Для этого, черенок на мгновение опускается в расплавленный и прокипевший парафин, после чего охлаждается в холодной воде.

Подвой же нужно в первую очередь обрезать, удалив, таким образом, старый куст. Далее, он очень осторожно раскалывается, чтобы в место раскола мог поместиться лишь черенок (если подвой большой и широкий, прививать можно даже 2-3 черенка). Его поверхность тщательно зачищается до гладкости.

Далее, черенок помещается в раскол, подвой очень крепко стягивается, чтобы как можно лучше уплотнить место соприкосновения срезов черенка и подвоя.

Стягивать подвой лучше тканью х/б, которая на следующий год самостоятельно разложится.

На зиму место прививки смазывается глиной.

Правила ухода за виноградом, которые помогут повысить его урожайность

Виноградарство достаточно хлопотное дело, которое, однако, хорошо вознаграждается хорошими и вкусными урожаями. Чтобы добиться максимальных показателей урожая винограда «Преображение», важно быть очень внимательным к кусту и не забывать его поливать, подкармливать и проводить регулярную обрезку. О том, как правильно это делать пойдет речь ниже.

Что нужно знать о правильном поливе винограда?

Виноград хотя и нуждается в хорошей увлажненности почвы, но большое количество воды может быть губительным как для самого виноградного куста, так и для урожая в общем.

Регулярные поливы рекомендуется проводить только перед началом цветения виноградного куста, и по завершению этого периода. Учащать поливы стоит только в периоды сильных засух. В это время вокруг виноградного штамба стоит выкопать неглубокую лунку (примерно в 5 сантиметров глубиной) и проводить полив именно в нее. Таким образом, почва будет увлажняться более-менее равномерно.

В случае чрезмерно обильных осадков во время формирования и дозревания урожая винограда, нужно выкопать дренажные ямы или канавы. В них будут оттекать излишки влаги, которые могут негативно повлиять на вкусовые качества винограда «Преображение».

Мульчирование и подкормка для улучшения качества почвы

Мульчирование играет очень важную роль для выращивания винограда. Проводится оно только весной и осенью, поскольку летом может стать причиной упаривания корневой системы виноградного куста. В указанные периоды оно способно не только удерживать влагу в почве, но и питать ее необходимыми для винограда веществами.

Для мульчирования используется перегной, в случае его отсутствия — торф. Выкладывать слой мульчи лучше слоем в 3 сантиметра, придерживаясь диаметра корневой системы виноградного куста. Очень важно проводить мульчирование перед наступлением морозов, поскольку слой мульчи будет защищать виноград от морозов.

Для подкормки винограда используются также фосфорно-калийные удобрения, которые рекомендуется вносить весной до начала цветения.

Как правильно укрывать виноград?

Поскольку данная форма винограда относится к культурным растениям, переносимость морозов в средней полосе у нее будет слабая. Поэтому, укрывать виноград «Преображение» на зиму нужно обязательно. Для этого, большая часть лозы (примерно 75%) удаляется. Лучше всего весь куст опустить к земле и присыпать почвой. Поверх почвы можно его укрыть сеном, приложив сверху шифером или кольями.

Молодые саженцы и привои укрывать намного проще. Для этого можно использовать старую кадку, у которой уже выпало дно. Установив ее вокруг винограда, во внутрь насыпается почва до того времени, пока саженец полностью не закроется почвой. При этом, почву лучше не уплотнять во избежание повреждения винограда.

Правила обрезки виноградного куста «Преображение»

Обрезка винограда проводится для выполнения многих целей. Во-первых, с ее помощью формируется виноградный куст. Во-вторых — регулируется урожай, поскольку его чрезмерное количество может сказаться на качестве. В-третьих, обрезка помогает стимулировать рост виноградных побегов.

Проводить обрезку нужно осенью. Если же укорачивать ветки виноградной лозы весной, то делать это нужно до ее распускания. Форма куста предпочтительней веерная. Таким образом, очень хорошо будут формироваться виноградные гроздья. Длина плодовой лозы регулярно укорачивается до 6-8 глазков, с оптимальным количеством побегов 24-35 штук.

Для того, чтобы не перегрузить куст большим количеством гроздьев, их тоже важно удалять. Оптимально оставлять на одном побеге одну гроздь. Многие также удаляют соцветия с пасынков, пытаясь улучшить основной урожай.

Борьба с вредителями винограда «Преображение»

Данная гибридная форма винограда имеет среднюю степень устойчивости перед поражением различными грибковыми заболеваниями. Для профилактики очень важно проводить хотя бы 2 опрыскивания за один сезон.

Веществами, растворами которых проводится опрыскивание, являются фунгициды и конкретно бордосская жидкость, концентрация которой не должна превышать 1%.

agronomu.com

Сорт винограда Преображение: особенности выращивания

В то время как обычный винограда еще созревает, некоторые садоводы уже собирают урожай с ранних его разновидностей. Сюда можно отнести сорт винограда Преображение, который славится очень вкусными сочными ягодами с тонкой кожурой.

Преображение очень полюбился садоводами за то, что кустарник при правильном уходе быстро приживается и способен давать высокий урожай. Не только в южных районах, но и в средней полосе с одного куста можно собрать до 20 кг вкуснейших ягод дважды за сезон. Поговорим о том, как сажать и как ухаживать за сортом.

Описание сорта

Сорт относится к гибридной форме растенияраннего срока созревания. Куст растет очень быстро и неприхотлив в уходе. Плоды готовы к сбору в конце июля – начале сентября (в зависимости от климатических особенностей региона) и имеют сочную сладкую мякоть. Сами ягоды овальные, крупные, розового цвета. Гроздья, как правило, конической формы средней плотности. Масса одной спелой грозди составляет примерно 0,7-1,5 кг. Степень зрелости определить достаточно просто – достаточно только сжать ягоду. И если она легко сжимается, значит уже готова к сбору.

За сезон при хороших условиях ухода с винограда сорта Преображение можно собирать урожай не менее 2 раз. Вот почему он так ценится садоводами, выращивающих кусты для дальнейшей продажи.

Как сажать виноград Преображение

Если вы решили посадить на своем участке виноград сорта Преображение, ответственно подойдите к покупке саженцев – убедитесь, что они не пересушены и не заморожены. Корни куста должны иметь белый цвет. Для проверки здоровья молодняка сделайте небольшой поперечный срез стебля. И если срез зеленого цвета, значит саженец вполне пригоден к посадке.

Основные правила посадки винограда Преображения таковы:

  • Самое удачное время посадки – весна. Земля к этому времени должна быть хорошо прогрета.
  • В почве делается углубление для дальнейшей высадки. Размер углубления определяется исходя из размера корневой системы. Учтите, что прикорневая шейка кустика после посадки в почву должна немного возвышаться над уровнем земли.
  • Непосредственно перед посадкой куст вымачивается. Для этого в емкость наливается теплая вода, сюда же добавляется немного специального стимулятора роста (но можно обойтись и без него). Корневая система опускается в воду.
  • После посадки винограда сорта Преображение площадь вокруг корней поливается водой и покрывается пленкой для создания парникового эффекта. Так саженец быстрее адаптируется к новому месту и начнет давать плоды.

В посадке нет ничего сложного. Даже если вы не собираетесь разводить виноград на продажу, вы всегда можете посадить пару кустиков у себя участке, чтобы уже в конце лета лакомиться вкусными ягодами.

Как ухаживать за виноградом Преображение

Что касается ухода, то в отличие от других разновидностей, Преображение относительно неприхотлив. Здесь можно выделить следующие особенности:

  • Кусты ежегодно подрезаются так, чтобы каждое растение на стебле имело не более 35 веток.
  • Спелые гроздья достаточно тяжелые, поэтому следите за тем, чтобы на каждом побеге было не более 1 завязи.
  • В течение сезона растение несколько раз следует опрыскать фунгицидами для профилактики грибковых заболеваний.
  • Несмотря на то, что виноград сорта Преображение может выдержать достаточно низкие температуры, накрывать в зимний период его все же необходимо. Перед покрытием лоза подрезается примерно на ¾. Для укрывания можно использовать либо сухую листву, либо обыкновенный рубероид.

Правильно ухаживая за посадками, вы создадите оптимальные условия для роста деревца и созревания сочных ягод.

osobnyachkom.ru

Читайте также:

Виноград Преображение: описание сорта, фото, отзывы

Среди разнообразных сортов винограда не так давно появился новый — Преображение, благодаря селекционной работе Крайнова В.Н. Пока сорт не внесен официально в Госреестр, однако, вызывает повышенный интерес у садоводов, так как гибридная форма взяла от базовых сортов самые лучшие характеристики: высокая урожайность, короткие сроки для получения урожая, отменные вкусовые качества.

Описание винограда сорта Преображение

Сорт винограда Преображение больше всего подходит для выращивания на территории южных районов России, на Украине и в Белоруссии. Однако многие садоводы не без успеха выращивают данный сорт в средней полосе России, и их не пугает, что усложняется агротехника, ведь растения требуется укрывать на зиму. Но оно того стоит.

Виноград Преображение созревает в рекордно короткие сроки: от 3 до 3,5 месяцев проходит от момента открытия почек до созревания первых кистей. Сроки немного меняются в ту или иную сторону, в зависимости от погодных условий и места произрастания сорта Преображение.

При описании винограда сорта Преображение, первым делом, отмечают величину ягод и кистей.

На фото рядом с ягодами помещают монеты или спичечные коробки для сравнения. Виноградные ягоды очень крупные, длиной до 5 см, вытянутой овальной формы. Вес одной ягоды может быть от 17 до 20 г. Зрелые ягоды сорта Преображение имеют светло-розовую окраску, сладкий, с легкой кислинкой вкус. Кожица средней толщины, покрыта белесым восковым налетом. Хорошо переносят транспортировку, обладают привлекательным товарным видом.

Вес виноградной грозди от 1,7 до 3 кг, форма чаще коническая. Хорошие продуктивные показатели делают виноград Преображение пригодным как для употребления в свежем виде, так и для переработки на вино и соки.

Другими примечательными техническими характеристиками сорта Преображение являются:

  • Материнский куст образует большое количество пасынков. В южных районах с них получают второй урожай;
  • Черенки можно прививать к любым другим сортам, они обладают высоким процентом приживаемости;
  • Однако и сам куст винограда Преображение без прививания вырастает больших размеров;
  • Высокая урожайность до 20 кг яс 1 куста не зависит от капризов природы;
  • Устойчивость к вирусным и грибковым заболеваниям и к поражению насекомыми-вредителями;
  • Сорт Преображение не капризен по отношению к почвам, плодородный грунт достаточно поместить в посадочную яму;
  • Виноград Преображение не склонен к горошению, вне зависимости от погодных условий;
  • Подходит для выращивания в средней полосе, переносит морозы до -20°С;
  • Важно, что опыляется без участия насекомых, так как цветки обоеполые. Опыление происходит при любом дуновении ветра. Искусственно опылять кисти сорта Преображение не требуется.

Сорт винограда Преображение обладает массой достоинств, которые проявят себя в полной мере, если за культурой правильно ухаживать.

Подробнее о сорте Преображение смотрите на видео:

Особенности выращивания винограда

Приобретаемый посадочный материал следует при покупке внимательно осмотреть. Не должно быть явных дефектов, говорящих о том, что саженец сорта Преображение был заморожен или пересушен, поврежден болезнями. У здорового саженца должны быть белые корни и на поперечном срезе побеги должны быть зелеными.

Посадка

Для посадки винограда Преображение следует определить правильное место. Виноград все-таки родом из южных районов, поэтому для его посадки выбирайте южные хорошо освещенные участки сада, для рядов выбирайте направление с севера на юг. Посадочные ямы следует располагать на расстоянии 2 м друг от друга.

Сорт Преображение нетребователен к качеству почвы. Тем не менее, если в саду почвы не очень плодородные, с низкой способностью к образованию гумусового слоя, то в посадочную яму требуется заложить перегной или компост, древесную золу и азотные удобрения. Такая питательная заправка делается для винограда Преображение на последующие 3-4 года. Результаты по выращиванию культуры будут значительно выше.

Участок для посадки должен быть хорошо дренированным, без застоя влаги, лучше его располагать на некотором возвышении. Посадочную яму выкапывают глубиной до 0,5 м. Перемешивают в ней вместе с грунтом все добавки, хорошо проливают водой, чтобы почва осела. И высаживают саженец. Такой способ посадки подходит для одревесневших саженцев сорта Преображение, которые в следующем сезоне уже дадут небольшой урожай.

Время для посадки выбирают с учетом климатических особенностей своей местности. Весной выбирают время, когда становится уже достаточно тепло, температура воздуха стоит не менее +15°С, а земля прогрелась на +10°С.

Уход

Дальнейший уход за виноградной культурой заключается в поливе, подкормке, обрезке и защите от вредителей и болезней. Следует соблюдать особенности ухода, тогда растение отблагодарит хорошим урожаем.

К особенностям полива следует отнести то, что виноград Преображение любит воду, однако, большое ее количество может погубить растение. Учитывайте и особенности строения корневой системы винограда. Она уходит глубь земли, и чтобы влаги хватило всем корням, поливать следует большими объемами.

Так, саженец первого года жизни поливают первое время после посадки раз в неделю 2 ведрами воды, затем примерно через месяц переходят на полив раз в 3-4 недели, однако, тратят на полив до 4 ведер воды.

Важно! Весной и осенью проводят влагозарядные поливы винограда.

Осенний влагозарядный полив проводят после опадения листвы. Он необходим, чтобы растение лучше перенесло зимние холода, так как сухие почвы промерзают сильнее, нежели влажные. Влагозарядные поливы проводят несмотря на наличие дождей, так как корневая система у растения очень мощная и влаги от дождей может не хватить, чтобы проникнуть вглубь.

Весной влагозарядный полив проводят для активации почек. Полив необходим, особенно если зима была малоснежной.

Для винограда Преображение можно использовать различные типы полива. Если система подземного полива не была заложена сразу, то полив проводят поверхностный. Для этого вокруг растения, отступив от корневой шейки около 30 см, делают борозду, глубиной до 20 см. Сюда заливают воду.

Излишек влаги влияет на вкусовые качества плодов сорта Преображение. Вкус ухудшается, ягоды становятся излишне водянистыми и безвкусными. Поэтому, если выдалось слишком дождливое лето, стоит сделать отводные канавки, по которым излишки влаги будут оттекать из приствольного круга.

Обрезка

Обрезка винограда Преображение является основным агротехническим приемом при выращивании, который позволяет:

  • Регулировать урожай винограда Преображение, так как большое количество гроздей ухудшает их качество;
  • Формировать виноградный куст, удаляя отплодоносившие лозы;
  • Омолаживать растение, так как обрезка стимулирует рост побегов винограда.

Подробней об обрезке винограда смотрите на видео:

Обрезку проводят весной, до того как распустились почки либо осенью. Для сорта Преображение, по отзывам виноградарей, предпочтительнее веерная обрезка куста осенью. Обрезанные побеги гораздо легче укрыть, и они без повреждений перенесут морозы. Весной спящие почки винограда распустятся гораздо раньше, что уменьшит период до получения урожая. Рассмотрим подробно, как проводить формирование куста.

В первый год жизни осенью оставляют 2 побега, которые укорачивают до 2 почек. На следующий год из каждой почки вырастет по побегу, осенью их укорачивают, один станет побегом замещения, на нем оставляют 2 почки, другой будет лозой плодоношения, на ней оставляют до 12 почек.

Виноградные лозы на зиму пригибают к земле, засыпают почвой и укрывают листами шифера или рубероида. Весной укрытие снимают, и лозы пригибают и подвязывают горизонтально к земле на шпалеру.

При следующей обрезке отплодоносившую виноградную лозу вырезают полностью до самого сучка. Там остается лишь 2 побега, 1 делают побегом замещения, укоротив до 2 почек, второй будет плодоносить в будущем сезоне, его длина формируется на 12 почек. Такая система обрезки повторяется из года в год.

Она предпочтительнее для винограда сорта Преображение, выращиваемого не только в умеренной полосе, но и в южных регионах. Позволяет укрыть растение, формировать 2 и более рукавов, что ведет к высокой урожайности сорта и отличным вкусовым качествам виноградных ягод.

Проблемы при выращивании сорта Преображение:

  • Способность образовывать большое количество побегов. Их потребуется удалять. Каждый побег способен дать одну кисть, однако, это слишком большая нагрузка для куста. Кисти у винограда Преображение очень крупные, им будет затруднительно вызреть;
  • Грибковые заболевания также могут стать проблемой. Чтобы не допустить поражения куста винограда болезнями делают профилактическое опрыскивание бордосской жидкостью в начале вегетативного сезона и после осенней обрезки.

Виноград способен преобразить ваш дачный участок, если вы потратите время на выращивание и уход за этой интересной и благодарной культурой.

Заключение

Виноградарство – сложный, но увлекательный процесс. Главная цель – получение достойного урожая винограда, бывает достигнута только при внимательном отношении к культуре, правильном выполнении агротехники. Не менее важную роль в успешном разведении винограда, является удачно подобранный сорт. По отзывам виноградарей, сорт Преображение имеет отличные характеристики по урожайности и товарному виду плодов, имеет обоеполые цветки, что удобно для опыления, устойчив к морозам, что делает возможным его выращивание в средней полосе.

Отзывы

Геннадий Протасов, 62 года, Московская обл

Виноград Преображение дает удивительный урожай. Кисти и ягоды огромные. Однако вкусовые качества подкачали. Нет той сладости, которой ожидаешь от винограда. Теряюсь в догадках, чего ему не хватает.

Сергей Кузьмин, 44 года, Ростовская обл

Сорту Преображение обязательно надо много влаги и солнечного света. Есть у меня несколько кустов, которые растут в тени. Ягоды имеют бледный окрас и слабовыраженный вкус.

селекция, где растет, описание сорта, посадка и уход, достоинства, отзывы

Виноград «Преображение» относится к числу новых сортов, которые в настоящее время ещё не введены в Государственный реестр, однако пользуются повышенным интересом у профессиональных виноградарей и садоводов-любителей нашей страны.

Характеристика сорта

Виноград «Преображение» выведен селекционером-любителем В.Н. Крайновым, и является сложным межвидовым гибридом с очень ранним сроком созревания. Длительность периода созревания от распускания глазков до полной зрелости ягод может варьироваться от 100 до 115 дней в зависимости от погодных факторов и региона культивирования.

Биологическое описание

Межвидовой гибрид винограда «Преображение» в корнесобственной и привитой культурах характеризуется сильным ростом. Кроме того, наблюдается очень высокая пасынкообразовательная способность материнских виноградных кустов. На пасынках формируется дополнительный урожай ягод.

Цветки обоеполые, что позволяет рассчитывать на высокую самоопыляемость. Виноградные кисти имеют коническую форму или обладают некоторой бесформенностью. Структура кисти характеризуется средней плотностью, иногда рыхлостью. Стандартная масса каждой грозди может в значительной степени варьироваться от 0,7 кг до 2,5 кг.

Техническая характеристика

Виноград «Преображение» формирует ягоды очень красивые, достаточно выравненные и крупные. Форма ягоды удлиненно-овальная, длинной до 5 см. Средний вес полностью вызревшей ягоды может варьироваться от 18 г до 20 г. Окрашивание средней по толщине кожицы розовое. Мякоть сочная, достаточно мясистая, с приятным и гармоничным вкусом. Сахаристость виноградного сока в ягодах 17-19 г/100 см3 при кислотности в 6-7 г/дм3.

Достоинства и недостатки

Межвидовая гибридная форма «Преображение» ещё не полностью прошла испытания, поэтому достаточно рано говорить о характерных достоинствах или недостатках этого винограда. Однако, исходя из заявленных характеристик, можно получить следующие сведения:

  • побеги вызревают удовлетворительно;
  • высокая совместимость с любыми видами подвоев;
  • урожайность данной гибридной формы очень стабильная;
  • показатели устойчивости к основным грибковым болезням составляют 3,5-4,0 балла;
  • отсутствие горошения вне зависимости от погодных условий, а также качественного состава почвы на участке выращивания;
  • виноград неустойчив к морозам в зимний период, а показатели морозоустойчивости не превышают -18оС;
  • транспортабельность и показатели товарности виноградных кистей очень высокие.

Можно отметить определённую перспективность данного винограда, что делает его год от года всё более популярным в кругу не только опытных виноградарей, но и садоводов-любителей. Средние показатели урожайности с каждого виноградного куста достигают 20 кг.

Фотогалерея

Виноград «Преображение»: выращивание и уход (видео)

Правила посадки

Гибридная форма «Преображение» выращивается виноградарями достаточно активно. Чтобы получить достойный урожай следует осуществить правильную посадку приобретённых саженцев:

  • саженцы не должны иметь каких-либо повреждений, поражений болезнями, пересушенной или подмороженной корневой системы;
  • самым подходящим временем для посадки является весна, когда почва достаточно прогрета после зимы;
  • глубина и диаметр посадочной ямы должны соответствовать размерам корневой системы с учётом незначительного возвышения прикорневой шейки саженца над уровнем грунта;
  • перед посадкой корневую систему саженца следует замочить в воде с добавлением специальных стимуляторов роста.

После высадки саженца грунт вокруг корневой системы следует обильно полить водой и прикрыть мульчей для получения парникового эффекта, что ускорит период адаптации растения к условиям культивирования.

Особенности ухода

При выращивании винограда «Преображение» особое значение приобретает соблюдение агротехники:

  • требуется обязательное укрытие виноградных кустов на зимний период с предварительной обрезкой лозы на ¾;
  • ежегодное осуществление подрезки с тем, чтобы каждый виноградный куст имел не больше 35 побегов;
  • грозди формируются достаточно объёмные и увесистые, что требует нормирования каждого побега до 1 или 2 завязей;
  • регулярные и достаточно обильные поливы целесообразно совмещать с проведением подкормок;
  • трёхкратное опрыскивание за вегетационный период кустов фунгицидами с целью профилактики от поражения грибковыми заболеваниями.

Основные мероприятия могут быть дополнены исходя из условий и региона культивирования данной гибридной формы.

Мы вам также предлагаем узнать об особенностях винограда «Фуршетный».

Отзывы садоводов

Межвидовая гибридная форма винограда «Преображение» уже обрела заслуженную востребованность и популярность, которая в последнее время растёт в геометрической прогрессии. Такой интерес к гибриду вызван не только очень ранним сроком вызревания урожая, а также большими размерами виноградных кистей, но и необычайно красивыми и вкусными ягодами.

Многие виноградари уже успели заметить некоторое сходство данного гибрида по вкусовым качествам и внешним показателям с сортами от селекционера-любителя В.Н. Крайнова под названиями «Виктор» и «Юбилей Новочеркасска». Однако именно гибрид «Преображение» в течение одного сезона при соблюдении агротехники способен сформировать два урожая, за что и высоко оценён садоводами, которые выращивают ягоды на реализацию.

Как обрезать виноград (видео)

Сорт винограда Преображение: описание, фото

Одним из новейших и популярнейших сортов любительской селекции стал виноград Преображение. Он был выведен В.Н. Крайновым в качестве столового и рекомендован для выращивания как в южных областях, так и в средней полосе.

Описание сорта

Среди неоспоримых преимуществ гибрида — исключительно раннее плодоношение. Первый урожай снимают обычно в середине августа, а второй, на отростках, — созревает до середины октября. Еще один плюс – очень крупные нарядные грозди, в среднем килограммовые, при этом горошения (мельчания отдельных ягод) практически не бывает. Однако иногда наблюдается разнокалиберность.

Ягоды очень крупные, около 13,9 граммов. Форма у них удлиненная, цвет светло-розовый, может выгорать до желтого. В любом случае созревшие ягоды определить просто – они размягчаются и это можно различить на ощупь. Вкус очень приятный, гармоничный, сладкий с легкой кислинкой, мякоть мясисто-сочная, тонкая кожица покрыта легким восковым налетом.

Внушительная урожайность – эксклюзивное свойство Преображения. 20 кг с куста – это среднее значение, причем показатель стабилен год от года. Ведь этот гибрид, в отличие от многих других сортов, способен плодоносить даже на пасынках. Высокой оценки также удостоились товарные и транспортабельные характеристики сорта.

Обрезка и укрытие на зиму

Необходимо отметить также значительную силу роста кустов Преображения и мощную корневую систему, которую они формируют. Обрезка рекомендуется на 6-8 глазков, плюс пинцирование лишних пасынков в период вегетации. Некоторые садоводы удаляют все пасынки, чтобы не дожидаться второго урожая, а сделать ставки на первый, самый ранний виноград. Вызревание побегов оценивается от среднего к высокому.

Краткая характеристика






4 / 5

13,9 г / 1,2 кг

Цвет

6 кг

Форма

овальные






Срок

сверхранний

сильная

-23°С

средний

Морозостойкость сорта вполне удовлетворительная, от -21ºС до -23ºС, большинство садоводов средней полосы рассматривают его как укрывной. Для сохранения лоз зимой их обрезают примерно на три четверти, пригибают, фиксируют и утепляют. Самым надежным, но и трудоемким методом является полное засыпание куста землей. В южных регионах можно рискнуть и лозы не утеплять, но как минимум снять с опор и уложить на землю крайне желательно. Формовку на шпалере рекомендовано делать веерную.

Уход и размножение

По отзывам виноградарей, весьма пластичен этот сорт и в размножении. В корнесобственной форме он мощнорослый, черенки хорошо укореняются и совмещаются с любыми подвоями.

Что касается ухода, то здесь определяющими зачастую становятся не лучшие стороны гибрида, а его недостатки. Так, невысокие значения имеет показатель устойчивости сорта к грибковым заболеваниям, всего 3,5 – 4 балла по пятибалльной шкале. Поэтому минимум пять раз за сезон необходимо провести опрыскивание виноградника.

Многие садоводы делают две обработки в период покоя и три — ситуативно в период вегетации, в зависимости от конкретных заболеваний, которые «поднимают голову» в конкретном году. Протравливают лозы соединениями меди (например, купоросом, бордосской или бургундской жидкостью) и железным купоросом, по возможности чередуя их. А в дальнейшем виноград опрыскивают системными препаратами (или баковой смесью) от главных «врагов» культуры.

Колоссальные грозди Преображения на видео:

Из заболеваний это оидиум, милдью, антракноз, серая гниль и другие, менее распространенные. Вредители на культуре также появляются — это паутинный клещ, зудень и листовертки. От филлоксеры культуру «уводят» даже не обработками, а прививкой на устойчивые подвои.

Отзывы

Отзывы о Преображении садоводов на форумах преимущественно положительные, большинство оценивает сорт как перспективный. Гибрид набирает популярность с каждым годом, и в ближайшее время ожидается внесение его в Госреестр сортов.

Сохраните статью:

Виноград преображение: описание сорта, фото, отзывы, видео

Очень сложно среди огромного разнообразия сортов винограда выбрать именно тот, который будет обладать достоинствами, отвечающими всем требованиям виноградарей.  Любители селекционеры, прислушиваясь к потребностям виноградарей, создают уникальные сорта. И хотя они не внесены в Государственный реестр, их популярность от этого не уменьшается. Именно к таким можно отнести Преображение.

Начнем с описания. Данный вид является гибридом, полученным селекционером Крайновым путем скрещивания двух сортов— Талисман и Кишмиш лучистый. Относится к ранним сортам, срок вызревания 115—120 дней. Самоопыляемый, высокоурожайный, устойчив к понижению температуры до -23 градусов.

С одного куста можно получить 20 кг. плодов. Куст сильнорослый, образует много побегов, в год дает два урожая. Первый урожай вызревает на основном кусте в августе. Второй урожай дают пасынки. Собирают его в октябре. Грозди достаточно больших размеров. Вес каждой кисти от 750 до 1500 грамм.

Грозди цилиндрической формы имеют среднюю плотность. Плоды овально-продолговатые, сочные, светло-розового цвета, переходящего в желтый. Масса ягоды 15—20 грамм. Вкус сладкий с легкой кислинкой. Кожица не плотная. Содержание сахара 18—19%.

Виноград преображение крупным планом на лозе

Достоинствами сорта являются:

  • урожайность стабильно высокая;
  • прекрасный вкус;
  • самоопыляемый;
  • пригодность к изготовлению вина;
  • хорошая транспортабельность;
  • морозоустойчивость;
  • высокий процент приживаемости черенков.

К недостаткам можно отнести:

  • низкая устойчивость к болезням;
  • необходимость укрывания на зимовку, несмотря на морозоустойчивость.

Гроздь сорта преображение в руке

Участок для посадки преображения должен располагаться на хорошо освещаемом месте, прикрытом от ветра. Это может быть южной стороной дома или другой постройки.

  Постройка защитит кусты от ветра, и в период сильных морозов даст дополнительное тепло.

Однако необходимо при посадке учитывать, что корневая система винограда достаточно мощная, поэтому не нужно сажать виноград вблизи деревьев, так как между ними будет борьба за питательные вещества.

Почва должна хорошо пропускать влагу и воздух. Хорошо произрастает на черноземной почве.

Данный сорт не выносит недостатка влаги, но и переизбытка в ней тоже не должно быть, следовательно, поливы должны быть умеренными. После полива обязательно рыхление грунта.  Удаление грунтовых вод на месте посадки должно быть не менее 1,5 метра от поверхности земли.

Лучшим временем для посадки преображения является весна. Однако, хорошие показатели роста и при осенней посадке.  Весной, как правило, осуществляют посадку саженцев. Осенняя посадка хороша для прививки черенков к подвою других сортов. В этом случае необходимо обязательно учитывать состояние черенка на момент прививки.

Посаженный виноград преображение в промышленном масштабе

Саженцами

Для весенней посадки необходимо правильно подобрать саженцы. При выборе следует учесть данные нюансы:

  • саженцы должны быть не перемороженные и не засохшие, иначе они не приживутся;
  • Срез на саженце должен быть зеленого цвета. Изменение цвета среза свидетельствует о непригодности к посадке;
  • Корень должен быть белый.

Посадочные ямы выкапывают через каждые 2 метра. Глубина ямы должна в двое превышать размеры корней. На дно ямы насыпаем слой керамзита. Он будет служить дренажом.

На дренажный слой насыпаем грунт, перемешанный с перегноем. Сверху насыпаем обычную почву. Яма получается засыпанной до половины.

Саженец готовим за сутки до посадки, вымачивая его в воде и обработав стимулятором роста корней.

Посаженные саженцы винограда преображение в промышленном масштабе

В яму углубляем саженец до корневой шейки. Она должна остаться на поверхности. Перед заглублением кончики корней необходимо немного обрезать.

Заглубленные саженцы присыпаем землей, осторожно утаптываем и обильно поливаем. Расход воды на каждый саженец — 3 ведра.

Весеннюю посадку осуществляют в тот момент, когда температура воздуха прогрета до +15 градусов, а температура почвы — до +10 градусов.

Черенками

Черенки можно прививать как в состоянии покоя, так и в распустившемся состоянии. Та же ситуация и с подвоем. Не зависимо от состояния подвоя и черенков, их нужно подготовить заранее. У черенков обязательно наличие 3 глазков.

Срезают черенки с нижнего края, отступив от нижнего глазка 2—3 миллиметра по форме клина. Перед посадкой черенок замочить на 5—6 дней в воде и окунуть в стимулятор роста корней.

Верхнюю часть черенка необходимо запечатать парафином. Это необходимо с целью удержания влаги в черенке, и повышения морозоустойчивости.

Необходимо окунуть верхнюю часть черенка в кипящий парафин и охладить под струей холодной воды.

Процесс посадки винограда черенками со шпалерой

Подвой обрезают, удалив с него старый куст. Поверхность подвоя необходимо зачистить до гладкости, убрать мусор и осторожно расколоть его, чтобы туда можно было вставить черенок.

Если поверхность подвоя позволяет, то прививать можно сразу несколько черенков. Подвой хорошо стянуть хлопчатобумажной тканью, чтобы прилегание подвоя к черенкам было плотным, и ткань за год спрела.

Место прививки залепить глиной, чтобы сохранялась влага. В дальнейшем виноград требует лишь ухода.

Последующий уход за сортом заключается в таких мероприятиях как:

  • полив;
  • удобрение;
  • мульчирование;
  • обрезка;
  • профилактика заболеваний и вредителей.

Спелые грозди преображения, готовые к сбору

Полив

Особенности полива состоят в том, чтобы влаги было достаточное количество, так как корни у данного сорта уходит глубоко под землю. Главное не переусердствовать в вопросе полива, так как переизбыток влаги уничтожит растение.

После посадки саженцы поливают 1 раз в 7 дней. Расход воды под каждый куст — 2 ведра. Спустя 30 дней полив выполняют один раз в 21—28 дней. Расход воды под каждый куст составит 4 ведра.

Каждой весной и осенью необходимо выполнять влагозарядные поливы!

Осенний влагозарядный полив проводят после того, как опадет листва. Выполняется он с целью наполнения почвы влагой.  Сухая земля промерзает больше, и лоза в ней может вымерзнуть. Влаги в земле должно быть достаточное количество, чтобы напитать корни, расположенные глубоко под землей.

Организация полива виноградника

Весной влагозарядный полив проводят с целью пробуждения почек, особенно это необходимо в случае малоснежной зимы.

Поливы могут быть как подземными, так и поверхностными. При поверхностном поливе вокруг саженца выкапывают лунку до 20 см. и заливают ее водой. Если погода дождливая, то необходимо вырыть отводные канавки для оттока воды. Нельзя допускать высокого уровня влажности, так как это влияет на вкусовые качества плодов. Они становятся водянистыми и безвкусными.

Подкормку необходимо внести весной, до начала периода цветения. Подкормку выполняют при помощи калийно–фосфорных удобрений.

Мульчирование

Следующим этапом ухода является мульчирование. Проводится эта процедура для удержания влаги и предотвращения роста сорной травы. Слой мульчи выкладывают толщиной 4 см. В качестве мульчи можно использовать перегной или торф.

До наступления морозов нужно выполнить мульчирование для сохранения куста от вымерзания. На лето мульчу снимают, иначе под ней может перепреть корень.

Обрезку винограда необходимо проводить осенью, или весной до пробуждения лозы. Проводят ее с целью формирования куста и регулирования урожая. Наиболее удачной считают веерную обрезку.

Суть данной обрезки заключается в том, чтобы укоротить плодовые лозы до 6 или 8 глазков, а количество побегов сократить до 25—26 штук. На каждом побеге оставляют по одной кисти, так как данный сорт принадлежит к высокоурожайным сортам и грозди его крупного размера. Это может привести к перегрузке лозы.

Начавший созревание сорт гибрид преображение

К вредителям Преображения относятся:

  • виноградная блошка. Она питается листьями. На нижней стороне листа откладывает личинки, и произведенное потомство поедает листья. Куст необходимо обрабатывать инсектицидом, распыляя его на раскрывшиеся почки;
  • подушечница виноградная питается соком винограда. Живет на побегах растения, вырабатывая защитную белую пленку, благодаря которой становится мало заметной, и защищена от воздействия инсектицидов. Методы борьбы — сбор вручную;
  • моль виноградная откладывает личинки на обороте листа, и вылупившееся потомство прогрызает листья и питается соком. Методы борьбы — обработка инсектицидами, утилизация опавших листьев и рыхление почвы;
  • виноградный клещ. Борются с данным вредителем при помощи инсектицидов.

Лист винограда с блошкой Виноградная кружковая моль Лист винограда, пораженный клещом Виноградная подушечница на лозе

Виноград подвержен следующим заболеваниям:

  • мучнистая роса. Грибковое заболевание, проявляющееся в виде белого налета, покрывающего листья. Для борьбы с ней применяют фунгициды, такие как Топаз, или Витарос;
  • бактериальный рак. Заражение происходит при обработке лозы нестерильным инструментом. Данное заболевание не лечится, инфицированная лоза вырезается;
  • пятнистый некроз. Появляется после зимовки. Проявляется в начале появлением пятен на листьях, а затем усыханием и отмиранием лозы. Опрыскивают препаратами, содержащими медь.

Бактериальный рак на виноградной лозе Виноград, пораженный мучнисой росой Пятнистый некроз на виноградных листьях

Выполняйте рекомендации опытных виноградарей, и сорт Преображение при правильном уходе порадует высоким урожаем плодов отличного вкуса.

Источник: http://profermu.com/sad/yagody/vinograd/sort-v/preobrazhenie.html

Виноград сорта Преображение: описание и фото растения

У каждого хозяина на даче или в частном доме растет виноград.

Существует множество видов, наиболее популярным сортом в последнее время стал виноград Преображение, описание сорта, фото можно найти практически на любом сайте, посвященном любительскому садоводству.

Этот виноград был создан путем скрещивания винограда кишмиш и сорта Талисман. Сорт был выведен селекционером В.Н. Крайновым.

Виноград Преображение

Прежде чем приступать к возделыванию этого сорта винограда, нужно изучить следующие вопросы:

  • как правильно выбирать и высадить саженцы сорта винограда Преображение;
  • как правильно ухаживать за кустами высаженного винограда.

Этот сорт винограда нравится садоводам, так как он очень хорошо приживается и приносит хороший урожай. Собирать плоды можно начинать с конца июля, и этот сорт обычно плодоносит до октября месяца. Плоды приносят как материнские ветки, так и пасынки. Виноград является самоопыляемым, что является несомненным преимуществом и позволяет получать хороший урожай.

Ягоды могут быть от желтого до розового цвета

Определить зрелость плода несложно, достаточно просто слегка придавить ягоду: если она мягкая, значит, виноград уже созрел. Одна гроздь может весить до 1,5 кг, а ягода до 20 г. Зачастую этот виноград выращивают на продажу, так как с одного куста можно собрать до 20 кг винограда.

За сезон с куста винограда сорта Преображение можно собрать 2 урожая. Если посмотреть на фото, можно увидеть, что ягоды у винограда сорта Преображение удлиненные, крупные и розового цвета, но если на виноград постоянно попадают солнечные лучи, то окрас ягод может измениться и они становятся желтого цвета.

Кожица практически не ощущается. На вкус виноград очень приятный и с легким оттенком кислинки. Хоть ягоды очень мясистые, в них очень много сока. Этот сорт отлично подходит для виноделия.

Данный сорт винограда может выдерживать морозы до –23, ягоды винограда легко переносят транспортировку и в хранении не привередливы.

Кусты винограда Преображение

Как выбрать и высадить виноградные саженцы?

Важно!Выбирая саженцы, следует обратить внимание, на то, чтобы чубук не был сухим или не был подморожен. Существует способ проверки жизнеспособности чубука винограда. Чтобы проверить чубук, следует сделать небольшой срез, в том случае, если срез будет зеленого цвета, значит, саженец хорошего качества.

Важно выбрать хороший посадочный материал

Для любого сорта винограда очень важно правильно выбрать место для посадки. При выборе места для высадки саженцев следует учитывать следующие нюансы:

  • хорошая увлажненность почвы;
  • отсутствие растений и деревьев на месте высадки;
  • открытый доступ к свету и солнцу;
  • место для высадки должно быть защищено от ветра.

Виноград Преображение можно сажать 2 способами: саженцами и прививанием черенков. У каждого из этих способов имеются определенные особенности.

Черенки винограда

Вопрос, как правильно посадить саженец винограда сорта Преображение, часто волнует садоводов-любителей. Виноград Преображение лучше всего высаживать весной.

Важно! Перед проведением высадки винограда следует обследовать чубуки на предмет повреждений. При соответствии требованиям сохранности можно приступать к процессу высадки саженцев в открытый грунт.

Посадка саженца винограда

Высадка саженцев состоит из нескольких этапов:

  1. За сутки до высадки саженца его следует поставить в банку или ведро с водой и добавить в воду стимулятор. Если имеются какие-либо повреждения на корневой системе, их нужно удалить.
  2. Подготавливается яма: она должна быть больше, чем корни саженца. Корневая система должна без каких-либо проблем там расположиться. Шейка саженца будет оставаться немного над поверхностью земли.
  3. На дно ямы выкладывается заранее приготовленное удобрение, перемешанное с землей, и сверху присыпается чистым грунтом. Это необходимо для того, чтобы корни винограда не получили ожог химсоединениями.
  4. Перед самим высаживанием кончики корней нужно обрезать секатором, для того чтобы лучше прижился саженец.
  5. Корень саженца засыпается землей, обильно поливается.
  6. Важный этап: почву у основания саженца накрывают пленкой, таким образом создавая парниковый эффект.

Посадка черенков винограда

В высадке винограда нет ничего сложного, главное — придерживаться правил.

Размножение винограда прививанием черенков

Второй способ посадки винограда Преображение – это прививание черенков. В этом случае также очень важно убедиться в качестве черенков, которые были отобраны для посадки:

  1. На каждом черенке должно быть минимум по 2-3 глазка. Это нужно для того чтобы в будущем прижившиеся черенки приносили хороший урожай. Расстояние от нижнего глазка до края черенка не должно быть больше чем 3-5 мм, если расстояние все-таки больше, то нужно отрезать лишнее.
  2. Замачивание. Перед посадкой черенки ставят в емкость с теплой водой и добавляют туда несколько капель стимулятора роста. Замачивать черенки нужно в течение суток.
  3. Если прививание делается осенью, то сохранению влаги и лучшей устойчивости к морозу черенку обеспечит парафин. Возьмите парафин и растопите его в отдельной емкости. Когда он закипит, окуните туда кончик черенка, а затем сразу же в емкость с холодной водой, для того чтобы парафин остыл и не сбежал.
  4. Подвой необходимо расколоть таким образом, чтобы там поместился только один черенок. Поверхность черенка нужно зачистить до гладкого состояния. После того, как соединены между собой подвой и черенок, подвой нужно туго перевязать тканью, а место прививки обмазать глиной.

Перед наступлением зимы следует укутать виноград, чтобы не было перемерзания. Если правильно ухаживать за виноградом, то он будет приносить хороший урожай.

На зиму виноград необходимо укрыть

Основы ухода за виноградом

Важно! После того как виноград посажен, это не означает, что на этом вся работа окончена, она только начинается. Даже несмотря на то, что виноград Преображение менее прихотлив, чем другие сорта, нужно соблюдать все необходимые требования по уходу за данным сортом винограда.

Каждый год надо делать обрезку винограда

Эти требования заключаются в следующем:

  1. Ежегодно нужно делать обрезку. Обрезать виноград можно осенью, но в этом случае он будет более подвержен зимним низким температурам. Если обрезка планируется в весенний период, то ее следует проводить до начала сокодвижения и распускания почек. Весной можно в процессе обрезки сразу же удалить поврежденную низкими температурами зимнего периода виноградную лозу. После проведения обрезки не должно оставаться больше 35 веток на кусте, а на каждом побеге по 6-8 почек.
  2. Так как одна гроздь может весить до 1,5-1,7 кг, нужно следить за тем, чтобы на одном побеге не было больше одной грозди.
  3. В летний период очень важно обрызгивать виноград, это необходимо для того, чтобы грибковая инфекция не повредила его, так как этот сорт не очень устойчив к грибковым инфекциям.

    Опрыскивание винограда защитит куст от многих болезней

  4. Главное, что нужно сделать с наступлением зимы, — это укутать виноград. Для этого можно использовать любой материал. Можно сложить весь куст на поверхность грунта и присыпать его землей. Перед тем как укутать виноград, его лозу нужно обрезать на 3/4.
  5. Полив. Этот сорт очень любит влажную почву. Виноградный куст нужно поливать, когда начинается цветение, полив следует регулярно проводить в течение всего периода цветения лозы, а в остальной период сильно заливать не нужно. Для предотвращения возникновения недостатка в воде в этот период следует сделать несколько лунок возле него и обильно залить их водой.
  6. Подкормка. 2 раза в год, весной и осенью, рекомендуется землю вокруг куста удобрять, обогащать питательными веществами. На протяжении вегетационного периода следует несколько раз проводить мульчирование. Проведение этой процедуры позволит регулировать воздушный и водный режим в верхних слоях почвы.

При правильном уходе за виноградом получится прекрасный урожай

Тот, кто выращивал такую культуру, может дать массу положительных отзывов о винограде Преображение.

Источник: https://florantino.ru/vinograd-sorta-preobrazhenie-opisanie-i-foto-rasteniya.html

Преображение — характеристики г.ф. винограда селекции Крайнова В.Н

Оригинатор: Крайнов В.Н., г. Новочеркасск, Россия

Синонимы: Юбилей Новочеркасска, Виктор, Юлиан, Ух ты, Потомок Ризамата, Шахерезада и т.д.

Родительская пара: Талисман х Кишмиш Лучистый (не точно)

Описание и основные характеристики: Преображение — настоящая селекционная удача Виктора Николаевича Крайнова. Форма стала настолько популярна и востребована среди любителей, что многие не постеснялись переименовать её множество раз и запустить в народ под новыми именами. Сорту Преображение свойственна довольно сильная изменчивость, в зависимости от условий выращивания, подвоя и т.д.

Это, видимо, и стало для самого Виктора Николаевича толчком к выделению кроме основной формы ещё двух её клонов — Юбилея Новочеркасска и ВиктОра. Позже появилось бесчисленное множество «клонов» сорта от других авторов, в числе которых Юлиан, Шахерезада, Потомок Ризамата и т.д.

Посадив два куста на одном участке на разных подвоях, вы убедитесь, что и форма ягоды, и её окраска в значительной степени изменяется. Срок созревания может сдвигаться на плюс/минус несколько дней. Такие же изменения происходят и в зависимости от условий года. Ниже показаны несколько фото, всё это г.ф. Преображение, выращенная в разных условиях и в разное время.

Вероятно, отцовской формой был Ризамат, которому также свойственна значительная изменчивость в зависимости от условий произрастания.

Кусты сорта сильнорослые, тип цветка обоеполый. Созревание наступает в первой половине августа. Грозди очень крупные и нарядные, массой до 1,5 кг и более, конические, с крылом, оптимальной плотности, горошение в гроздях незначительное. Форма ягоды варьирует от овальной до овально-удлиненной, иногда яйцевидной с заостренным кончиком.

Цвет ягод от бледно- до ярко-розового. Средняя масса 12-14 гр и более. Мякоть мясистая, кожица легко съедаемая. Вкус простой, гармоничный, без муската. Устойчивость к болезням на уровне 3,5-4 балла, к морозу сорт неустойчив, требуется укрытие на зиму. Плодоносность почек и урожайность кустов высокие. Рекомендуется средняя обрезка лоз плодоношения на 6-8 глазков.

Товарные качества очень высокие.

Фото сорта винограда Преображение

Источник: https://vinedresser.info/sorta/154-preobrazhenie

Виноград Преображение: описание раннего сорта и правила выращивания и ухода

Преображение — относительно молодой сорт винограда. Однако уже успел стать популярным среди многих дачников: и профессионалов, и любителей. Поспевает в кратчайшие сроки, дает плоды крупные, постоянный урожай и совсем неприхотлив в уходе.

История селекции сорта

Преображение является гибридом Кишмиша лучистого и Талисмана. Создатель сорта — селекционер Крайнов В.Н. из г. Новочеркасска. Созданные им сорта и гибриды отличаются высокими показателями урожайности (Виктор, Юбилей).

Новый гибрид винограда Преображение пока на испытательном селекционном этапе и не входит в официальный государственный реестр.

Тем не менее его уже выращивают на своих участках как для частного, подсобного хозяйства, так и в промышленных масштабах на территории всей страны.

Виноград Преображение — фото

Описание винограда Преображение

Преображение — высокорослый сорт винограда, образующий огромное количество пасынков. Лоза виноградника вызревает наполовину длины побега. Цветки мужского и женского пола, поэтому проблем с опылением у винограда Преображение нет.

Виноградины крупного размера, продолговатой, овальной формы. Длина может достигать от 5-ти до 6-ти см. В некоторых случаях можно встретить и более крупные экземпляры, размером с коробок для спичек. Масса плодов различна, находится в пределах от 12-ти до 30-ти гр.

Фото винограда Преображение

Окрас виноградин значительно меняется в зависимости от условий климата. Чаще всего встречаются плоды нежного, светло-розового оттенка. Иногда можно увидеть и желтоватый оттенок на ягодах. Когда растению достаточно солнечного света, грозди становятся насыщенного, яркого красного цвета. Недостаточность солнечного света приводит к бледности созревших плодов. Внутри находится сочная, кисло-сладкая мякоть. Горчинка во вкусе отсутствует. Кожура настолько тонкая, что даже не ощущается при употреблении плодов.

Внимание! Не рекомендуется допускать перегруженности лозы гроздями, так как в этом случае плоды потеряют всю палитру вкуса, став пресными и содержащими большое количество воды.

Характеристика винограда Преображение

Гибрид Преображение создан для выращивания в южной и средней широтах страны. Для роста и развития идеально подходит южный и умеренный климат.

Среди главных характеристик сорта Преображение: устойчивость к погодным условиям, уровень урожайности, использование плодов, иммунитет, достоинства и недостатки сорта.

Виноград Преображение — видео

Виноград Преображение: морозостойкость и засухоустойчивость

Находится на среднем уровне, что означает способность прекрасно выдерживать морозы до 23 градусов ниже 0, судя по описанию гибрида на упаковке. Однако некоторые отзывы говорят о том, что даже при температуре в – 18 градусов виноград Преображение может погибнуть.Устойчивость к засухе средняя.Сорта Винограда!Виноград КодрянкаВиноград кишмиш Аттика

Урожайность сорта винограда Преображение

Для полноценного формирования и созревания спелых плодов винограда необходим промежуток времени от 100 до 115-ти дней. На юге сбор проводят уже в последних числах июля. Когда уход за виноградом Преображение организован и проводится правильно, с одного кустарника можно получить урожай в размере от 20-ти до 25-ти кг спелых ягод.

На заметку! Собирать стоит только спелые плоды. Определить спелость ягод достаточно легко: необходимо немного сжать виноградину с обеих сторон. Если это происходит легко, плод не трескается, значит, урожай поспел и готов к сбору.

Область применения плодов

Плоды гибрида Преображение применяют в необработанном виде, то есть в сыром. Также из виноградин делают вина высокого качества, изюм.

Плоды отлично переносят транспортировку на абсолютно разные расстояния, сохраняя красивый, свежий вид еще длительное время, а также – отменные вкусовые качества.

Хранить виноград рекомендуют в прохладном помещении, оборудованном хорошей вентиляцией.

Устойчивость винограда Преображение к болезням и вредителям

Самая огромная проблема для виноградников – осы, которых привлекают ягоды из-за содержания в них большого количества сахара. Они способны нанести значительный урон урожаю, ухудшая в том числе и внешний вид плодов.

Еще одна проблема для винограда – подушечницы и блошки. Первые потребляют сок винограда, а вторые – листья.

Гибрид Преображение имеет средний иммунитет, соответственно и устойчивость к заболеваниям на этом же уровне. Чаще всего поражается мучнистой росой, раком, некрозом (пятнистым).

Достоинства и недостатки сорта

Так как гибрид еще молодой, выявление сильных и слабых сторон находится еще в процессе.

На сегодняшний день можно выделить следующие преимущества винограда Преображение:

  1. крупный размер виноградин;
  2. прекрасная транспортабельность;
  3. красивый вид ягод, что особенно важно при выращивании винограда в коммерческих целях;
  4. раннее созревание;
  5. постоянная урожайность;
  6. высокая цена;
  7. отсутствие горечи во вкусе;
  8. простота в уходе;
  9. нетребовательность к качеству, составу почвы.

Из недостатков у сорта Преображение можно выделить:

  • жирование виноградной лозы;
  • средний уровень стойкости к низким температурам;
  • необходимость зимнего укрытия;
  • потребность в систематической обрезке;
  • снижение качества вкуса в случае перегруженности лозы;
  • средняя устойчивость к болезням;
  • подверженность нападению насекомых.

Далее поговорим о том, как правильно посадить и вырастить гибрид.

Виноград Преображение: агротехника выращивания

Уже было сказано о неприхотливости Преображения по отношению к почве. Прекрасно приживается и быстро адаптируется в любом грунте. Однако стоит обязательно защитить посадку от сильных ветров и не располагать вблизи с крупного размера кустарниками и прочими деревьями.Интересно!Жимолость Морена

Выбор и подготовка саженцев винограда к посадке

Подходящим временем для посадки сорта Преображение является середина апреля. Грунт уже достаточно прогрет к этому моменту, а корням достаточно времени, чтобы хорошо прижиться на новом месте до появления первых заморозков.

Подготовка саженцев винограда Преображение для посадки является важным этапом процесса. Стоит покупать саженцы в специализированных магазинах. При покупке нужно обращать внимание на состояние корней и наличие повреждений на коре. Корневая система здорового саженца имеет белый цвет. Срез должен быть зеленым.

Для лучшей приживаемости на месте посадки опытные овощеводы настоятельно советуют замачивать саженцы на пару дней в теплой воде, добавив предварительно стимулятор роста корней, например, «Корневин».Как проходит посадка винограда Преображение будет описано далее.

Посадка винограда Преображение

Сначала нужно как следует перекопать почву на участке, после чего сделать лунку глубиной в половину метра. Необходимо соблюдать дистанцию между посадками, не меньше метра. Самое подходящее расстояние составляет от 2-х до 3-х метров между кустарниками.

На дно лунки насыпают смесь в несколько последовательных слоев:

  • Первый слой, высотой в 25 см, состоит из смеси перегноя и питательного грунта. Уплотняют слой.
  • Второй слой составляет от 8-ми до 10-ти см с обязательным применением неорганического удобрения. В состав входит 300 гр суперфосфата, калий, древесный уголь (в размере 3-х литров). Все тщательно смешивают с основным грунтом.
  • Третий слой в 5 см, уже без внесения подкормок.
  • Представленный выше вариант заполнения посадочной ямы только один из возможных. Необязательно применять именно его.
  • Саженцы располагают так, чтобы шейка корня была на 3-4 см над землей. Остальные части корня должны быть хорошо засыпаны грунтом.
  • После посадки саженца землю вокруг него уплотняют и увлажняют.

Посадка винограда

Последующий уход за виноградом Преображение

Гибрид не относится к капризным культурам. Ему нужен только своевременный полив, подкормка и обрезка. Это основные процедуры по уходу.

Как поливать виноград

Полив требуется умеренный. Только что высаженные молодые деревца поливают 1 раз в неделю. На каждый куст уходит около 20-ти литров воды. Спустя 30 дней полив сокращают до раза в месяц, а количество воды увеличивают в 2 раза, то есть до 40 литров на растение.

Подкормка винограда Преображение

Удобрение вносят несколько раз в сезон.

В весенний период проводят подкормку винограда Преображение либо селитрой (с содержанием аммиака), либо мочевиной.

Осенью виноградным кустарникам требуются минеральные подкормки с фосфором в составе, медь. Последняя способствует повышению устойчивости к морозам.

Обрезка винограда Преображение

Обрезку винограда Преображение делают осенью или весной

Весной обрезку проводят до распускания почек. При обрезке оставляют не больше 28-ми побегов на каждом кустарнике.

Как проводить обрезку и подвязку винограда Преображение — видео

Обрезка Винограда

Как бороться с вредителями и болезнями

Уже было отмечено в качестве слабых сторон данного гибрида – подверженность нападению насекомых. Среди них осы, подушечница, тля, трипсы и прочие.

Чтобы устранить непрошенных «гостей» натуральными средствами, применяют:

  • мыльный раствор;
  • воду с чесноком;
  • раствор с медным купоросом (4%).

Можно приобрести специальные средства для борьбы с вредителями в магазинах.

Борьба с болезнями и вредителями винограда — видео

Среди них:

  • Фитоверм.
  • Калипсо.
  • Интра-вир.

Гибрид Преображение отличается слабой устойчивостью к грибкам и бактериям. В качестве профилактики применяют фунгициды для винограда.

Среди них: Топаз, Витарос, Хорус и другие.

Как подготовить виноградник Преображение к зимовке

Преображение требует обязательного укрытия на время зимы. Побеги собирают в отдельные пучки и пригибают к земле, фиксируя, например, скобой из металла. Можно использовать шифер.

Подготовка винограда к зимовке — видео

Сверху делают мощный укрывной слой из лапника сосны, опавшей листвы, речного песка, опилок, сена. Есть специальный материал, предназначенный именно для укрытий растений на зимовку. Он хорошо пропускает воздух и является прекрасным вариантом укрытия.

Размножение винограда Преображение черенками

Существует два способа размножения данного сорта винограда: саженцами, черенками.

Выше по тексту подробно рассказано, что делать с саженцами винограда Преображение для посадки, как правильно подготовить, посадить, ухаживать. Теперь немного о втором виде размножения.

Размножение винограда черенками — видео

Черенки нарезают либо весной, либо осенью. На каждом должно присутствовать от двух до трех глазков. Важно, чтобы было расстояние от 3-х до 5-ти мм между глазками. Перед прививкой черенок располагают в воде комнатной температуры, предварительно добавив в нее биологический стимулятор роста.

Когда прививка происходит осенью, возникает необходимость повысить устойчивость к морозу. Для этого черенок опускают на пару секунд в разогретый парафин, а потом в прохладную воду.

На подвое делают надрез в виде буквы «Т». Черенок помещают в этот разрез, после чего защепляют кору и берут плотную ткань для обвязки место прививания. Стоит обработать надрез и место прививки варом, чтобы не допустить заражения. Повязку можно снимать только после образования первых листочков.

Виноград Преображение: отзывы о сорте тех, кто выращивает

Владимир, Московская область:Выращиваю два года на своем дачном участке виноград Преображение. Чтобы виноградины были насыщенного цвета, необходимо выращивать деревья на хорошо освещаемом месте.

Обязательно провожу профилактику, чтобы растения не болели, так как иммунитет недостаточно высокий, чтобы противостоять возбудителям самостоятельно без посторонних средств. Урожай хороший, второй год держится на одном уровне. Пока деревца небольшие, составляет 12 кг с одного растения.

На зиму укрываю виноград Преображение материалом, который приобретаю в специализированном отделе.Любовь, г. Волгоград:Я отдала предпочтение «Преображению», потому что он дает хороший и, что немаловажно для меня, постоянный урожай. То есть со временем его не становится меньше, как обычно бывает с виноградными культурами.

Выращивая данный гибрид, нужно внимательно следить за нагрузкой лозы, чтобы не допускать перегруза. Плоды на таких ветвях не годятся для употребления, на мой взгляд. Становятся безвкусными и водянистыми. Следить за нагруженностью лозы необходимо и в целях хорошей зимовки. Вообще с зимовкой приходится немного повозиться.

В том числе и при выборе места посадки. Когда достаточно количества солнечного света, лоза созревает полноценно и может спокойно пережить зиму, сохранив целостность. Перед зимовкой требуется хорошо увлажнять грунт.

Виноград Преображение – хороший выбор и для начинающего, и для опытного садовода.

Он прост в уходе, имеет постоянный уровень урожайности. Ягоды пригодны для употребления в свежем виде. Подходят и для переработки. Их можно выращивать и для личного подсобного хозяйства, и в коммерческих целях, на продажу.

Здравствуйте, уважаемые садоводы и огородники! Меня зовут Ольга Ивановна, являюсь дачником с большим стажем. Свой огород люблю всей душой. К конструктивной критике отношусь с интересом, всегда готова обсудить любые вопросы.

Источник: https://osemenah.ru/yagoda/vinograd/280-vinograd-preobrazhenie.html

Виноград Преображение: описание сорта, отзывы

Когда грозди обычного винограда ещё наливаются на солнышке и созревают, ранние сорта винограда уже готовы к употреблению. К такому сорту относится виноград «преображение». Ягоды его с тонкой кожурой, очень вкусные и сочные. Данный сорт популярен среди садоводов. Виноград «преображение», описание которого сразу же заинтересовало садоводов, при грамотном уходе быстро приживается и высокие урожаи не заставляют себя ждать.

История селекции винограда «преображение»

Выведенный виноград «преображение» стал настоящим конкурентом лучшим уже существующим сортам. Появление его стало переворотом в селекции столового винограда. Для выведения этой гибридной формы были взяты лучшие качества базовых сортов:

  • незначительные сроки для получения полноценного урожая;
  • отменные вкусовые качества;
  • высокая урожайность.

Автором данного сорта является Крайнов Виктор Николаевич. Он же был автором таких сортов, как «виктор», «юбилей Новочеркасска». Они очень схожи между собой, практически идентичны. В народе садоводы называют их «тройкой Крайнова».

Но из всех сортов Виктор Крайнов выделил именно «преображение». Он был самым лучшим из всех его творений и самый любимый. Выведен сорт в 2004 году на территории личного хозяйства селекционера.

А уже в дальнейшем он распространился по странам СНГ и за их пределами.

Результат селекции Крайнова — виноград «преображение»

Общее описание

«Преображение» очень быстро созревает. Приблизительно за 3 — 3,5 месяца от набухания почек до полноценного созревания первых ягод. Но всё зависит от климатической полосы выращивания и от погодных условий. Поэтому эти сроки могут немного меняться.

Куст способен переносить условия высокой влажности. Неплохо приживается в непригодных почвах и в неблагоприятных климатических условиях. Даже при таких условиях не наблюдается горошения ягод. Замечено, что при нахождении гроздей под прямыми солнечными лучами, ягоды не приобретают розовый оттенок.

Описание сорта винограда «преображение» указывает на его положительные характеристики, среди которых стоит выделить:

  • на материнском кусте образуется немалое количество пасынков, за счет которых южные регионы получают второй урожай;
  • стабильно высокая урожайность;
  • хорошая устойчивость к различным заболеваниям;
  • очень высокая приживаемость черенков при прививании к другим сортам винограда;
  • для опыления не обязательно участие насекомых.

Внешний вид

Описывая сорт «преображение», стоит отметить величину кистей и размер ягод. Виноградины крупные, имеют вытянутую форму, до 5 см длинной, весом 17 – 20 граммов. После полного вызревания они имеют светло-розовый оттенок.

Виноград «преображение» сладкий, с лёгкой кислинкой. Кожица тонкая с восковым белесым налётом. Внешний вид гроздей очень привлекательный. Транспортировка переносится отлично.

Для того чтобы он показал себя во всей своей красе, рекомендуется после созревания дать гроздям ещё немного повисеть на кусте.

Так выглядит спелая гроздь винограда «преображение»

Вес виноградной грозди составляет около 1 кг, хотя встречаются экземпляры и по 3,0 кг. Форма её в основном коническая. Отличные показатели продуктивности, позволяют употреблять его в свежем виде или использовать его для переработки.

Особенности сорта

Это очень перспективный сорт, отличающийся хорошими результатами и показателями. Широко используется как на приусадебных участках, так и выращиваются в промышленных масштабах.

Устойчивость

Устойчивость к заболеваниям у винограда «преображение» оценивается как средняя. Требуется химическая обработка на протяжении всего вегетационного периода, несколько раз за сезон.

Для лечения и профилактики гнили применяются следующие препараты:

  • топаз;
  • бордоская жидкость;
  • шавит;
  • железный купорос;
  • танос.

Виноград «преображение» может легко перенести мягкую зиму без дополнительного укрытия. Его морозостойкость до минус 21 градуса. Но, несмотря на это лучше производить укрытие. Для этого удаляется около 75 % лозы, куст прижимается к земле и засыпается утеплителем.

Аналогично другим сортам, «преображение» подвержен заболеванию милдью и оидиум. Обработка противогрибковыми препаратами поможет справиться с этими заболеваниями.

Для лечения виноградников от клеща применяют акарицидные препараты. Птицы и осы являются врагами для винограда. Для уничтожения ос применяют ловушки с липкой жидкостью. От птиц помогут мелкоячеистые сети, пугала и т.д.

Уход

Виноград «преображение» не очень требователен к уходу и считается неприхотливым. Кусты требуют ежегодной подрезки. Каждое растение должно иметь до 35 веток, но не более. Грозди относительно тяжелые, поэтому необходимо следить, чтобы на побеге была только одна завязь.

В течение всего лета требуется полив кустов. Поливать нужно обильно – данный сорт любит воду. Но и злоупотреблять влагой не нужно, чтобы не погубить растение. В таких случаях ягоды становятся безвкусными и чрезмерно водянистыми. При дождливом лете садоводы для отвода излишней влаги от ствола растения делают водоотводные канавки.

Урожайность

Виноград «преображение» обладает превосходной дегустационной оценкой и стабильно хорошей урожайностью. Это отменный товарный сорт. Кислотность ягод составляет 6-7 г/дм3, сок ягод содержит сахар в пределах 17-19 г/дм3.

С одного куста садоводы собирают до 20 кг винограда дважды в сезоне. И это касается не только южных регионов, но и средней климатической полосы.

Обзор отзывов о выращивании и применении

Изучив отзывы о винограде сорта «преображение», видно, что он знаком многим садоводам. Они отмечают, что сорт быстро развивается после посадки и очень быстро даёт довольно неплохой урожай.

При употреблении в пищу винограда «преображение» абсолютно не ощущается жесткой кожицы, как у некоторых других сортов. Он не приторный, сладкий. В первых числах августа грозди практически все уже спелые.

К тому же на пасынках можно получить дополнительный урожай, хотя в таком случае ягоды будут меньшего размера и менее сладкие.

Источник: https://bvk.news/produkty/yagody/vinograd-preobrazhenie.html

Виноград «Преображение»: описание сорта, фото, отзывы

В настоящее время появляется довольно большое количество разнообразных гибридных сортов винограда, которые отличаются высокой производительностью и неприхотливостью ухода за ними. Это позволяет получать садоводам и дачникам значительный урожай при минимальных по времени и усилиям затратам. Одним из таких является виноград «Преображение». Описание сорта и фото я любезно для вас описал, да и отзывы в сети Интернет имеет данный сорт винограда преимущественно положительные. Именно поэтому, прежде чем начать его выращивать, необходимо разобраться во всех характеристиках этого сорта и особенностях ухода за ним.

Характеристики сорта винограда «Преображенеи»

Сорт «Преображение» специалистами относится к гибридным формам, отличающимся ранним сроком созревания. Уже в период с конца июля и до начала сентября садоводы могут наслаждаться мякотью достаточно вкусных кисло-сладких ягод. Их сахаристость составляет до 18/100 см3. Срок созревания зависит от климатических условий; чаще всего он не превышает 110-130 суток.

Форма грозди коническая. Ее масса находится в пределах от 700 до 1500 граммов. Урожайность составляет до 20 килограммов плодов из одного куста. Сами же ягоды овальные, имеющие довольно обширную цветовую гамму – от желто-розового до ярко-красного оттенка. Размер одной ягоды составляет около 3,5-5 сантиметров в длину. При этом вес не очень большой – от 13 до 20 граммов.

Отличительной особенностью винограда «Преображение» является его морозоустойчивость. Кусты способы выдерживать понижение температуры воздуха зимой до -23 градусов по Цельсию.

Источник: https://sovety-ogorodniku.ru/opisanie-vinograda-preobrazhenie.html

Сорт винограда Преображение: описание, фото

Одним из новейших и популярнейших сортов любительской селекции стал виноград Преображение. Он был выведен В.Н. Крайновым в качестве столового и рекомендован для выращивания как в южных областях, так и в средней полосе.

Описание сорта

Среди неоспоримых преимуществ гибрида — исключительно раннее плодоношение. Первый урожай снимают обычно в середине августа, а второй, на отростках, — созревает до середины октября. Еще один плюс – очень крупные нарядные грозди, в среднем килограммовые, при этом горошения (мельчания отдельных ягод) практически не бывает. Однако иногда наблюдается разнокалиберность.

Ягоды очень крупные, около 13,9 граммов. Форма у них удлиненная, цвет светло-розовый, может выгорать до желтого. В любом случае созревшие ягоды определить просто – они размягчаются и это можно различить на ощупь. Вкус очень приятный, гармоничный, сладкий с легкой кислинкой, мякоть мясисто-сочная, тонкая кожица покрыта легким восковым налетом.

Внушительная урожайность – эксклюзивное свойство Преображения. 20 кг с куста – это среднее значение, причем показатель стабилен год от года. Ведь этот гибрид, в отличие от многих других сортов, способен плодоносить даже на пасынках. Высокой оценки также удостоились товарные и транспортабельные характеристики сорта.

Обрезка и укрытие на зиму

Необходимо отметить также значительную силу роста кустов Преображения и мощную корневую систему, которую они формируют.

Обрезка рекомендуется на 6-8 глазков, плюс пинцирование лишних пасынков в период вегетации.

Некоторые садоводы удаляют все пасынки, чтобы не дожидаться второго урожая, а сделать ставки на первый, самый ранний виноград. Вызревание побегов оценивается от среднего к высокому.

4 / 5
13,9 г / 1,2 кг
Цвет 6 кг
Форма овальные
Срок сверхранний
сильная
-23°С
средний

Морозостойкость сорта вполне удовлетворительная, от -21ºС до -23ºС, большинство садоводов средней полосы рассматривают его как укрывной. Для сохранения лоз зимой их обрезают примерно на три четверти, пригибают, фиксируют и утепляют.

Самым надежным, но и трудоемким методом является полное засыпание куста землей. В южных регионах можно рискнуть и лозы не утеплять, но как минимум снять с опор и уложить на землю крайне желательно.

Формовку на шпалере рекомендовано делать веерную.

Уход и размножение

По отзывам виноградарей, весьма пластичен этот сорт и в размножении. В корнесобственной форме он мощнорослый, черенки хорошо укореняются и совмещаются с любыми подвоями.

Что касается ухода, то здесь определяющими зачастую становятся не лучшие стороны гибрида, а его недостатки. Так, невысокие значения имеет показатель устойчивости сорта к грибковым заболеваниям, всего 3,5 – 4 балла по пятибалльной шкале. Поэтому минимум пять раз за сезон необходимо провести опрыскивание виноградника.

Многие садоводы делают две обработки в период покоя и три — ситуативно в период вегетации, в зависимости от конкретных заболеваний, которые «поднимают голову» в конкретном году.

Протравливают лозы соединениями меди (например, купоросом, бордосской или бургундской жидкостью) и железным купоросом, по возможности чередуя их.

А в дальнейшем виноград опрыскивают системными препаратами (или баковой смесью) от главных «врагов» культуры.

Колоссальные грозди Преображения на видео:

Из заболеваний это оидиум, милдью, антракноз, серая гниль и другие, менее распространенные. Вредители на культуре также появляются — это паутинный клещ, зудень и листовертки. От филлоксеры культуру «уводят» даже не обработками, а прививкой на устойчивые подвои.

Отзывы

Отзывы о Преображении садоводов на форумах преимущественно положительные, большинство оценивает сорт как перспективный. Гибрид набирает популярность с каждым годом, и в ближайшее время ожидается внесение его в Госреестр сортов.

Источник: https://remontanta.ru/sorta-vinograda/176-vinograd-preobrazhenie

виноградников пермакультуры? (форум пермакультуры в перми)

Есть ли они у кого-нибудь, и как вы их организуете с пермакультурой?

Я исследовал, и вот что я обнаружил.

Мне удалось найти две основные модели виноградников для пермакультуры.

1. Ряды виноградных лоз с травой, растущей между рядами.

Преимущества

a) Обеспечивает здоровую микросреду в траве так же, как на хорошем пастбище или в системе нулевой обработки сельскохозяйственных культур.
б) Животные могут пастись на полосах травы. Цыплят можно использовать выброшенными в год. В период покоя лоз можно использовать других животных.

c) Можно срезать перед зимними заморозками, чтобы уменьшить вероятность заморозков винограда. Все эксперты сходятся во мнении, что низкая трава или голая земля лучше всего предотвращают повреждение винограда на лозах от мороза. Траву можно стричь низко, или подстригать косилкой, чтобы обрезки шли под лозами в качестве мульчи, или даже собирать урожай как солому.
d) Хотя технически это монокультура винограда, трава может быть засажена многими видами трав, клевера и азотфиксирующих бобовых. Это снизит риски монокультурного сельского хозяйства и принесет пользу земле.

Недостатки

a) Низкая стрижка травы во избежание повреждения от мороза может препятствовать микробиологической среде обитания. Это не проблема, если вы находитесь в районе, где не бывает заморозков до сбора урожая винограда в октябре.

2. Ряды виноградных лоз со съедобными растениями, растущими между рядами.

Преимущества

a) Вы можете выращивать пищу в неиспользуемом месте. Отлично, если у вас ограниченное пространство.

б) Было бы меньше монофонического урожая. Многовидовые растения снизят вероятность болезней, вредителей и т. Д.

c) Вы можете выращивать азотфиксирующие растения, такие как фасоль, арахис, другие бобовые, или даже дикон, чтобы помочь измельчить почву для повышения водопроницаемости.

Недостатки

а) Вы не сможете пасти животных между рядами.Можно было провести проволочную сетку и пасти цыплят между виноградными лозами и овощами, но это было бы настоящей головной болью.

б) Пищевой сад не будет получать много солнечного света после того, как виноградные лозы начнут нарастать и расти листья.

Прочие соображения. Земля, с которой нужно работать.

1. Вчера я искал недвижимость, в которой я не хотел бы выращивать виноград на акр в одном месте. Я бы хотел сохранить нетронутыми дубовые пучки, чтобы они могли пасти свиней моей исторической породы, а также пастбища, открытые для выпаса коров.Здесь есть каменистые, серые холмистые участки, а участки земли выходят на юг. Я бы использовал эти области. Виноград, кажется, хорошо себя чувствует на каменистой мусорной почве, которая не подходит для других культур или пастбищ. Плохое качество почвы вынуждает их глубоко уходить корнями в почву. Судя по тому, что я читал, это то, что делает Пино-нуар одними из лучших. Хорошего Пино-нуара не существует. Это либо здорово, либо ужасно. Если вы можете вырастить отличный Пино Нуар, вы сможете вырастить отличный сорт любого вина. Я оградил эти участки и после того, как виноград начал созревать, накрыл их сеткой для птиц.Это были бы маленькие пятна, разбросанные повсюду. Это, вероятно, также уменьшило бы любые проблемы, связанные с монокультивированием.

2. На прошлой неделе я смотрел на пару свойств, которые были довольно широко открытыми пастбищами. Настолько открытый, что мне пришлось бы сажать дубы, чтобы мои свиньи получали желуди. Было бы слишком легко сделать виноградник размером в акр. Прямоугольная, квадратная, треугольная, какой бы формы земля ни позволяла изобразить контур, сток воды, области, где я хотел бы создать болота для садов, прудов и т.На одном из них есть крутой каменистый рельеф, но он может быть слишком крутым, а другой выглядит так, как будто он получает много дождевых стоков и может быть слишком сырым для части года. Оба свойства были пастбищами открытого пастбища. Никакой пермакультуры не видно. У них обоих есть видимые признаки эрозии. Это можно исправить с помощью некоторого интенсивного выпаса и возвращения земли, а затем более интенсивного выпаса скота, создания небольших плотин из камней в сезонных ручьях, канавах и т. Д.

До недавнего времени я никогда не думал о создании виноградника.Сначала я думал только о том, чтобы вырастить несколько виноградных лоз, чтобы сделать собственное вино, и немного столового винограда для продажи на придорожном киоске. Чем больше я исследовал, тем больше это казалось хорошей идеей. В этом есть хорошие деньги, если ты умеешь делать это хорошо, и я думаю, что я был бы дураком, если бы не попробовал. Тем более, что я планирую получить землю в предгорьях Сьерры центральной долины Кали около 1200 или ниже. Все сводится к диверсификации. Не хранить все яблоки в одной корзине. Лучше иметь много корзин, и апельсинов, и винограда, и орехов пекан, и черники, и малины, и, и, и, и т.д. тоже !!!

Я искал в этом месте пермакультуру виноградника.Я не нашел много. Если у кого-то есть ссылки, предложения, что-то, что можно добавить к вышеизложенному, и т. Д., Я был бы признателен.

Oracle покупает Grapeshot

Oracle в настоящее время пересматривает существующую дорожную карту продукта Grapeshot и будет предоставлять клиентам рекомендации в соответствии со стандартными политиками обмена информацией о продуктах Oracle. Любые получаемые в результате функции и сроки выпуска таких функций, определенные в обзоре Oracle дорожной карты продукта Grapeshot, остаются на исключительное усмотрение Oracle.Вся информация о дорожной карте продукта, переданная Grapeshot или Oracle, не представляет собой обязательства по предоставлению каких-либо материалов, кода или функций, и на нее не следует полагаться при принятии решений о покупке. Он предназначен только для информационных целей и не может быть включен в какие-либо контракты.

Предупреждение относительно заявлений прогнозного характера
Этот документ содержит определенные прогнозные заявления об Oracle и Grapeshot, в том числе заявления, которые связаны с рисками и неопределенностями в отношении предлагаемого приобретения Oracle Grapeshot, ожидаемых выгод для клиентов и общих перспектив бизнеса.При использовании в этом документе слова «ожидает», «может», «будет», «с нетерпением ждать», «ожидаемый» и подобные выражения, а также любые другие утверждения, не являющиеся историческими фактами, предназначены для обозначения этих утверждений как перспективных. смотря заявления. Любое такое заявление может зависеть от множества факторов, многие из которых находятся вне контроля Oracle или Grapeshot, которые могут привести к тому, что фактические результаты и результаты будут существенно отличаться от тех, которые спроектированы, описаны, выражены или подразумеваются в этом документе из-за количество рисков и неопределенностей.Потенциальные риски и неопределенности включают, среди прочего, возможность того, что ожидаемая синергия объединенных компаний не может быть достигнута после закрытия, объединенные операции могут не быть успешно интегрированы своевременно, если вообще будут, общие экономические условия в регионах, в которых бизнес любой компании может ухудшиться, и / или Oracle или Grapeshot могут пострадать от других экономических, деловых и / или конкурентных факторов. Соответственно, нельзя давать никаких гарантий того, что какие-либо события, предусмотренные в прогнозных заявлениях, произойдут или произойдут, или, если какое-либо из них произойдет, какое влияние они окажут на результаты деятельности или финансовое состояние Oracle или Grapeshot.Предупреждаем, что не следует чрезмерно полагаться на прогнозные заявления, которые действительны только на дату этого документа. Ни Oracle, ни Grapeshot не обязаны обновлять какую-либо информацию в этом документе.

Надежный протокол стабильной трансформации неэмбриогенных культур клеток винограда (Vitis vinifera L.) и Taxus x media | Мартинес-Маркес

Образец цитирования:

Мартинес-Маркес А., Моранте-Карриель Дж., Рамирес-Эстрада К., Кусидо Р., Селлес-Маршарт С., Палазон Дж., Педреньо М. А., Брю-Мартинес Р.Надежный протокол стабильной трансформации неэмбриогенных культур клеток винограда (Vitis vinifera L.) и Taxus x media.
Дж. Биологические методы 2015; 2 (2): e21.
DOI: 10.14440 / jbm.2015.51

Артикул

.

Ascensión Martínez-Márquez 1 , Jaime Morante-Carriel 1 , 2 , Karla Ramírez-Estrada 3 , Rosa M. Cusidó 3 , Susana Sellés-Marchart , 4 , Хавьер Палазон 3 , Мария Анхелес Педреньо 5 , Роке Брю-Мартинес 1 *

1 Группа протеомики и функциональной геномики растений, Кафедра агрохимии и биохимии, Факультет естественных наук, Университет Аликанте, Аликанте, Испания. 2 Группа биотехнологии и молекулярной биологии, Государственный технический университет Кеведо, Кеведо, Эквадор. 3 Лаборатория физиологии растений фармацевтического факультета Барселонского университета, Joan XXIII sn, E-08028 Barcelona, ​​Spain. 4 Исследовательский технический центр, Отдел протеомики и геномики, Университет Аликанте, Аликанте, Испания. 5 Группа пероксидаз растений, Департамент физиологии растений, Университет Мерсии, Мерсия, Испания

* Автор, ответственный за переписку: Dr.Роке Брю-Мартинес, Grupo de Proteómica y Genómica Funcional de Plantas, Departamento de Agroquímica y Bioquímica. Facultad de Ciencias. Universidad de Alicante, Ctra. Сан-Висенте-дель-Распейг б / н. E-03080 Аликанте. ИСПАНИЯ, Электронная почта: [email protected]. Тел. И Факс: +34 965 0

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Поступило 12.03.2015 г .; Доработка получена 8 июня 2015 г .; Принята в печать 8 июня 2015 г .; Опубликовано 24 июня 2015 г.

Abstract Одна из основных задач метаболической инженерии в системах клеточных культур — увеличить выход вторичных метаболитов.Эффективные методы трансформации являются приоритетом для успешного применения метаболической инженерии к клеточным культурам растений, которые продуцируют биоактивные или терапевтические соединения, такие как Vitis vinifera и Taxus x media . Целью данного исследования было создание надежного метода трансформации неэмбриогенных культур клеток этих видов. V. vinifera cv. Гаме / cv. Клеточные линии Monastrell и Taxus x media использовали для трансформации, опосредованной Agrobacterium , с использованием Gateway-совместимой Agrobacterium sp.бинарная векторная система для быстрого и надежного клонирования ДНК. Клеточные линии Taxus x media и Vitis поддерживали в культуре более 4 и 15 месяцев, соответственно, без потери экспрессии репортерного гена или устойчивости к антибиотикам. Введенные гены не оказали заметного влияния на рост клеток или привели к внеклеточному накоплению фитоалексина транс -ресвератрола ( t -R) в ответ на активацию метилированными циклодекстринами (MBCD) и метилжасмонатом (MeJA) в трансгенных виноградных лозах. линии клеток по сравнению с родительским контролем.Описанный здесь метод представляет собой отличный инструмент для использования экспоненциально растущих геномных ресурсов для увеличения, оптимизации или диверсификации производства биоактивных соединений, генерируемых культурами клеток виноградной лозы и тиса, и предлагает лучшее понимание многих областей биологии виноградной лозы и тиса.

Ключевые слова : Система Agrobacterium , GFP, культура клеток виноградной лозы, ресвератрол, стабильная трансформация, Taxus культуры клеток

Введение

Фитоалексины Vitaceae, известные как виниферины, составляют группу молекул, принадлежащих к семейству стильбенов [1-3], которые являются производными структуры trans -Resveratrol ( t -R) (3,5,4′- тригидроксистильбен).Эти соединения накапливаются в тканях виноградной лозы на определенных стадиях развития [4,5] и, в результате инфекции или стресса, в некоторых случаях проявляют сильную противогрибковую активность [6]. Помимо активности фитоалексина, t -R проявляет биологическую активность, которая важна для здоровья человека. Таким образом, в нескольких исследованиях сообщалось о положительном влиянии систем моделирования сердечно-сосудистых заболеваний [7], рака груди [8], рака прямой кишки [9], рака простаты [10], воспаления и старения [11,12] и т. Д. в последнее время ожирение [13,14].Терапевтическая ценность этих соединений стимулировала спрос на нутрицевтические, косметические и фармацевтические применения и, следовательно, вызвала интерес к поиску предпочтительно устойчивых систем для производства t -R и его производных в больших количествах.
Клетки растений и культуры тканей все чаще используются в качестве систем производства биоактивных вторичных метаболитов коммерческого применения, таких как шиконин, таксол, алкалоиды или берберин [15-20]. Тем не менее, несмотря на обширные исследования по стандартизации клеточного роста и отбору высокопродуктивных клеточных линий, количество случаев, в которых вторичные метаболиты коммерчески продуцируются культивируемыми клетками, относительно невелико.Для преодоления этого недостатка можно использовать две основные стратегии: выявление и метаболическая инженерия. Выявление — это эмпирический подход, применяемый для стимуляции клеточных культур продуцировать вторичные метаболиты; например, культуры клеток виноградной лозы, вызванные только метилированными циклодекстринами (MBCD) [21] или в сочетании с метилжасмонатом (MeJA) [22,23], оказались эффективной системой для биопродукции t -R с общей конверсией 30% подачи углерода сахарозы в углерод ресвератрола [24].Метаболическая инженерия в настоящее время применяется к микроорганизмам в качестве альтернативного способа биопродукции t -R и аналогов [25-28] из-за очевидных преимуществ перед культурами растительных клеток для разработки трансформированных штаммов и увеличения продуктивного процесса. Тем не менее, урожайность полученных культур клеток виноградной лозы все еще остается непревзойденной.
Метаболическая инженерия преследует двойную цель — увеличить выход вторичных метаболитов в системе культивирования клеток и вычитать этапы этих расширенных путей, и может быть наиболее эффективной стратегией.Недавно было продемонстрировано, что узкие места в метаболическом пути таксола локализуются на последних этапах его биосинтеза, и сверхэкспрессия генов, участвующих в этих этапах, является одной из основных проблем, с которыми приходится сталкиваться при биотехнологическом производстве этого противоракового соединения [29]. . Высокопродуктивные выделенные культуры клеток виноградной лозы могут быть дополнительно улучшены в процессе производства с помощью метаболической инженерии, а также использованы в качестве специализированных штаммов для диверсификации накопленных конечных продуктов.
В исследованиях растений «представляющий интерес ген» часто клонируют в бинарные векторы, которые можно использовать для трансформации, опосредованной Agrobacterium [30].Производство генетических конструкций, несущих трансген, часто затруднено из-за трудоемкой традиционной технологии клонирования, которая основана на рестрикционном переваривании и лигировании. Однако шлюз-совместимый Agrobacterium sp. бинарная векторная система способствует быстрому и надежному клонированию ДНК [31]. Система Gateway была адаптирована для трансформации растений, чтобы облегчить создание векторов для крупномасштабной сверхэкспрессии, мечения и сайленсинга [32]. Генная инженерия предлагает новые инструменты для исследований, направленных на функциональную характеристику представляющих интерес генов виноградной лозы.Несколько групп опубликовали отчеты о трансформации Vitis [33-40]. На сегодняшний день Gollop et al. [41] представили доказательства стабильной трансформации неэмбриогенных культур (NEC). Тем не менее, степень успешности трансформации и долгосрочная устойчивость установленной трансформированной клеточной культуры, по-видимому, не были решающим требованием в их исследовании, и об этом не сообщалось. Здесь мы описываем надежный протокол для успешного стабильного преобразования A. tumefaciens-, опосредованного V.линии клеток vinifera с геном GFP под контролем pCaMV35S. Он не оказал вредного воздействия на продуктивность ресвератрола после 13 месяцев стабильной трансформации культур клеток Vitis и предоставляет экспериментальные доказательства применимости протокола к трансформации NEC Taxus x media в качестве соответствующего примера других представляющих интерес видов. в производстве биоактивных метаболитов .

Материалы и методы

Растительный материал

В.vinifera L. cv. Каллус Gamay был любезно предоставлен доктором. Ж. К. Печ и А. Латше (ENSA, Тулуза, Франция) в 1989 г. Vitis vinifera L. cv. Каллусы Monastrell albino были созданы в 1995 г., как описано ранее [42]. Эти клеточные линии поддерживали как в твердых, так и в жидких культурах в среде Gamborg B5, как описано в другом месте [21]. В жидкой культуре линии суспензии клеток виноградной лозы обычно поддерживали периодическим субкультивированием каждые 14 дней, добавляя один объем свежей среды и распределяя разведенную культуру по двум культуральным колбам. T. x media каллус получен из молодых стеблей 3–4-летних деревьев тиса. Продольно разделенные пополам срезы стебля помещали таким образом, чтобы внутренняя поверхность среза входила в контакт с культуральной средой, оптимизированной для индукции каллусов [43]. Полученные клеточные линии поддерживали в твердых культурах в оптимальной питательной среде, как описано в [44]. Калли обычно субкультивировали каждые 14 дней. Жизнеспособность клеток определяли путем окрашивания витальным красителем флуоресцеина диацетат и наблюдения под микроскопом [45].

Реагенты трансформации

A. tumefaciens Штамм C58C1 (pMP90) [46], который несет бинарную плазмидную векторную систему, содержащую репортерные гены зеленого флуоресцентного белка (EgfpER), был использован для исследования трансформации. Вектор pK7WG2D, 1 (Лаборатория системной биологии растений; Университет Гента, Бельгия) (, рис. 1, ) содержит промотор / терминатор вируса мозаики цветной капусты 35S (CaMV) и селективный маркер неомицинфосфотрансферазы (NPTII) в области Т-ДНК. вектора. Штаммы Agrobacterium были сделаны химически компетентными и трансформированы бинарным вектором стандартными методами [47].

Рисунок 1 . Область Т-ДНК стандартного бинарного вектора pK 7 WG 2 D, 1 [ 72 ], используемая для экспериментов по трансформации. P35S, промотор CaMV 35S; Prol D, A. rhizogenes rolD промотор; nptII, неомицинфосфотрансфераза под контролем промотора P35S; EgfpER, зеленый флуоресцентный белок с сигнальной последовательностью ER под контролем промотора Prol D; T35S, терминатор CaMV 35S; LB, левая граница; РБ, граница правая; ДНК: короткий фрагмент (269 п.н.) ДНК Taxus , введенный для удаления гена ccdB из целевой плазмиды; attR1 и attR2, сайты attR реакций рекомбинации Gateway ® .

Протокол преобразования

Бактериальная культура: A. tumefaciens , содержащая желаемую бинарную плазмиду, выращивали на твердой среде YEB [48] при 28ºC в течение 48 часов. Единственную колонию инокулировали в 50 мл жидкой среды YEB, которая содержала 100 мг / л рифампицина, 75 мг / л спектиномицина и 20 мг / л гентамицина, и инкубировали в течение ночи при 28ºC при встряхивании (180 об / мин). 50 мл среды YEB, дополненной теми же антибиотиками, инокулировали 1 мл этой однодневной культуры и выращивали при 28ºC и 180 об / мин до тех пор, пока OD 600 не достигнет примерно ~ 0.1–0,4, в соответствии с Batoko et al. [49]. Бактериальную среду удаляли центрифугированием всей культуры при 14 000 об / мин в течение 3–5 мин. Полученный бактериальный осадок промывали и суспендировали в 1 мл жидкой среды Gamborg B5 со 100 мг / л ацетосирингона (AS).

Подготовка растительных клеток и заражение: При исходе из твердой культуры 10–12 г каллуса Vitis или Taxus переносили в стерильную колбу Эрленмейера, содержащую 50 мл среды Gamborg B5.При запуске из жидкой культуры использовали 50 мл 7-дневной суспензии клеток Vitis в Gamborg B5 (суспензия клеток Taxus не анализировалась). К жидким препаратам растительных клеток добавляли 100 мг / л AS и обрабатывали ультразвуком при 100 Вт в ультразвуковой ванне (Bandelic electronic RK100) в течение 1 мин для Monastrell и в течение 2 × 1 мин для Gamay и Taxus . Сразу после этого добавляли бактериальную суспензию. Инфицированную культуру инкубировали на шейкере (110 об / мин) в течение 30 мин в темноте при 24ºC.

Совместное культивирование и отбор трансформированных клеток : Затем суспензии выливали на стеклянный фильтр и оставшуюся биомассу промывали холодной средой. Для удаления избытка жидкой среды применяли мягкий вакуум. Биомассу сливали в течение 5 мин на стерильную бумагу, а затем переносили в твердую среду Гамборга В5, которая содержала 100 мг / л AS. После 2 дней совместного культивирования при 25 ° C в темноте клетки переносили в твердую среду Gamborg B5, которая содержала 250 мг / л цефотаксима и 60 мг / л паромомицина при 25 ° C в темноте.Периодические субкультуры растущих колоний каллуса проводили при снижении концентрации цефотаксима. Через 4 месяца цефотаксим удаляли из среды и трансформированным клеткам Vitis и Taxus давали возможность расти в модифицированной селективной среде Gamborg B5 с 60 мг / л паромомицина.

Флуоресцентная микроскопия

Изображения трансформированных флуоресцентных клеток получали с помощью конфокального микроскопа (Leica TCS SP2; Leica Microsystems, Wetzlar, Германия).Флуоресценцию GFP наблюдали при возбуждении криптоновым / аргоновым лазером 488 нм с использованием эмиссионного фильтра BP 450–490 с диаметром точечного отверстия 77 мкм, чтобы получить толщину оптического среза.

Выделение, амплификация и анализ ДНК

Геномная ДНК

была выделена из 150–300 мг клеток Vitis или Taxus с использованием E.Z.N.A. Мини-набор HP Plant DNA (OMEGA) в соответствии с инструкциями производителя. Присутствие EgfpER и отсутствие генов virB в трансгенных каллусах / суспензиях Vitis и трансгенных каллусах Taxus было обнаружено с помощью ПЦР-анализа, в котором для амплификации праймеров использовали 5´-ATGGTGAAGACTAATCTTTTTC-3´ и 5´-TTACAGCTCGTCCTTCTifyGTAC-3´ кодирующую область длиной 798 п.н. гена EgfpER и праймеры 5´-TCGGGCACCGTCAGCTTGACG-3´ и 5´-GTTAAGAAGATCGCCTATTGT-3´ использовали для амплификации фрагмента 800-п.н. кодирующей области virB.Реакции амплификации состояли из 1 цикла при 95 ° C в течение 5 минут и 30 циклов при 94 ° C в течение 1 минуты, 54 ° C в течение 1 минуты, 72 ° C в течение 90 секунд с последующим 10-минутным циклом удлинения при 72 ° C. Плазмидная ДНК, используемая при трансформации, служила в качестве положительного контроля, тогда как ДНК из нетрансформированных клеток Vitis и Taxus дикого типа использовалась в качестве отрицательного контроля. Продукты ПЦР анализировали электрофорезом в 1% агарозных гелях.

Извлечение и анализ белка

Белковые экстракты каллуса / суспензии Vitis и каллуса Taxus получали, как описано Martínez-Esteso et al. [50]. Вкратце, растительный материал гомогенизировали в буфере для экстракции (50 мМ HEPES, 0,25 М сахароза, 1% [вес / объем] PVPP, 5% глицерин, 10 мМ EDTA, 10 мМ Na 2 O 5 S 2 , 10 мМ кислоты аскорбиновой, 1 мМ PMSF и ингибитор сигма протеазы) в соотношении 2 мл на грамм растительного материала при 4 ° C.
Экстракт центрифугировали при 10000 × g в течение 10 мин при 4 ° C. Супернатант осаждали при 100000 × g при 4 ° C в течение 90 мин. Осадок, содержащий микросомальную фракцию, ресуспендировали в 0.2 M трис-HCl при pH 7,4, 10% глицерина, 0,01% бромфенолового синего и ингибитор протеазы Sigma при 4ºC в течение 2 часов. Концентрацию белка в образцах определяли с помощью анализа белков RC DC (BIO-RAD) на основе модифицированного метода анализа белков Лоури [51].

Белки растворяли в 12% полиакриламидном геле в естественных условиях в ячейке Hoefer miniVe (GE Healthcare) при 200 В и 4ºC. Гели сканировали в лазерном сканере с регулируемым режимом Typhoon 9410 (Amersham Biosciences) с использованием синего лазера (488 нм) в качестве источника возбуждения, а испускающуюся флуоресценцию (526 нм) регистрировали с помощью короткопроходного фильтра.

Выявление трансформированной культуры клеток виноградной лозы и анализ ресвератрола

Обработка клеточных культур всегда выполнялась в асептических условиях. Выявление проводили, как описано в Bru et al. [21] в колбах Эрленмейера на 250 мл, которые содержали конечный объем 100 мл культуры. Концентрации элиситора составляли 50 мМ для MBCD и 100 мкМ для MeJA, согласно предыдущим экспериментам, проведенным в исследовании зависимости реакции от дозы [23]. Через 72 ч средние культуры собирали фильтрованием при небольшом вакууме.Эксперименты проводились в двух экземплярах. Отработанную среду использовали для анализа t -R, как описано в другом месте [22], с помощью жидкостной хроматографии в ВЭЖХ Agilent серии 1100, оснащенной детекторами с ионной ловушкой UV-vis и ESI-MS / MS. Для определения стильбеноидов 10 мкл образца после прохождения через фильтр Anopore 0,2 мкм вводили в колонку Mediterranean C18 (25 × 0,46 см, размер частиц 5 мкм) (Tecknokroma, Барселона, Испания) и элюировали в градиенте растворители A (0,05% TFA) и B (0.05% TFA в метаноле: ацетонитрил 60:40 об. / Об.) При скорости потока 1 мл / мин. Градиент составлял: 0 мин. 22,5% В; 4 мин, 35% B; 8 мин, 40% B; 14 мин, 65% B; 19 мин, 65% B; 21 мин. 22,5% B; 23 мин, 22,5% B. Стандарты t -R были приобретены у ChromaDex Inc. (Ирвин, Калифорния, США). В наших хроматографических условиях время удерживания t -R составляло 8,4 мин.

Результаты

Создание культуры клеток, трансформированных Vitis / Taxus.

Область Т-ДНК бинарной плазмиды, используемой для трансформации растительных клеток ( рис.1 ) содержал ген NPT II, ​​который кодирует белок неомицин фосфотрансферазы и придает устойчивость к аминогликозидным антибиотикам [52]. Предварительные эксперименты, проведенные для определения подходящего селекционного агента, показали, что нетрансформированные культуры Vitis вполне толерантны к канамицину и что клетки все еще росли, хотя и медленно, при 500 мг / л антибиотика ( Рисунок S1 A и S1B ). Напротив, клетки Vitis проявили чувствительность к паромомицину, и полное ингибирование роста клеток имело место при типичной селективной концентрации 60 мг / л ( Рисунок S1 C и S1D ).Наблюдаемая нечувствительность NEC V. vinifera к канамицину контрастировала с сообщенной токсичностью этого антибиотика на развитие побегов V. vinifera и подвоев [53,54] или на эмбриогенные культуры V. vinifera [55]. Однако было показано, что чувствительность к канамицину варьируется в зависимости от типа ткани и стадии развития [33]. Сообщалось также о росте культур клеток Taxus cuspidata на твердой среде, содержащей до 800 мг / л канамицина [56].Высокая пропорция ускользания нетрансформированных клеток Vitis , полученная при использовании канамицина в качестве селективного агента, и продемонстрированная устойчивость культур клеток Taxus к канамицину позволили нам установить паромомицин в качестве селективного агента для обоих видов. Другой важный момент при разработке подходящего протокола трансформации — обработка ультразвуком. Трансформанты не были получены, если культуры клеток не были кратковременно обработаны ультразвуком в ванне для облегчения взаимодействия Agrobacterium- с растительными клетками, как ранее описано для различных тканей и видов растений [57].

A. tumefaciens штамм C58, который содержал pK7WG2D, 1 успешно трансформировал две линии V. vinifera (т.е. сорт Gamay и сорт Monastrell), исходя из каллусных или суспензионных культур, и одну линию Taxus. x media , начиная с мозоли. Зеленую флуоресценцию можно было обнаружить с помощью микроскопического исследования в этих клетках в течение 4 недель после трансформации, и экспрессия GFP была обнаружена во всех колониях каллуса клеток Vitis и Taxus , инфицированных Agrobacterium (данные не показаны).Через 4 недели на селекционной среде устойчивые к паромомицину колонии каллуса были достаточно большими, чтобы собрать биомассу и перенести в новые чашки со свежей селекционной средой (, рис. 2A, , 2C, ). Нетрансформированный материал не рос и становился коричневым в среде для селекции ( Рисунок S2 A 2C ), в то время как трансформированный каллус интенсивно рос в среде для селекции ( Рисунок 2D 2F ).

В течение 3–4 месяцев после начальной трансформации было получено достаточное количество каллусного материала для запуска суспензионных культур Vitis , таким образом, были созданы быстрорастущие суспензии.Трансгенные каллусы и суспензионные культуры, выращенные в среде, содержащей паромомицин, не показали заметной разницы в росте клеток по сравнению с нетрансформированной родительской линией клеток, выращенной в среде, не содержащей паромомицин. Как трансгенные, так и нетрансгенные каллусы субкультивировали с одинаковой частотой, и увеличение свежей биомассы после 14 дней инокуляции 10 г в 40 мл свежей среды составило 19,5 ± 0,4% / 15,3 ± 0,4% для трансформированной культуры cv. . Гаме / cv. Культур Monastrell соответственно и 20.0 ± 1,5% / 15,9 ± 1,0% для нетрансформированного сорта. Гаме / cv. Monastrell культур соответственно. Трансгенные культуры Vitis поддерживали при непрерывном отборе паромомицина в течение более 7 месяцев и в среде без паромомицина еще в течение 6 месяцев без потери ни энергии, ни экспрессии GFP ( рис. 2G и 2H ). Трансгенные культуры Taxus поддерживали при непрерывном отборе паромомицина более 4 месяцев без потери ни активности, ни экспрессии GFP ( рис.2И ).

Оценка эффективности трансформации неэмбриогенных каллусных и суспензионных культур клеток является особенно сложной задачей по сравнению с трансформацией источников эксплантов, используемых для возможной регенерации трансгенной ткани. В отличие от экспериментов с типичными эксплантами, такими как листья или эмбрионы, неэмбриогенная суспензия / каллус состоит из миллионов недифференцированных клеток и клеточных агрегатов, где каждая клетка является потенциальным эксплантатом. В успешных экспериментах, описанных в этом отчете, в среднем было получено 20 и 17 трансформированных каллусов на 1 г свежей массы посевов V.vinifera cv. Monastrell и cv. Gamay клеток, соответственно, и не было обнаружено различий между исходным материалом (суспензией клеток или каллусом). Было получено десять трансформированных каллусов на 1 г свежей массы посеянных клеток Taxus . Около 90–95% каллусов Vitis и 75% трансформированных каллусов Taxus успешно поддерживались при непрерывном отборе паромомицина.

Рисунок 2 .Генетическая трансформация культуры неэмбриогенных клеток V. vinifera cv. Гаме / cv. Monastrell и Taxus x media . А-С. Трансформированные колонии каллусов из сред Monastrell (A), Gamay (B) и Taxus x (C) через 4 недели в среде для отбора. Д-Ф. Трансформированный каллус интенсивно рос в селекционной среде. Трансформированная мозоль из A. tumefaciens из V. vinifera cv. Монастрель / cv. Показаны Gamay (D, E) через 13 месяцев после заражения и трансформированный каллус из среды Taxus x через 4 месяца после заражения (F). G-I. Стабильная экспрессия GFP, распределенная по эндоплазматическому ретикулуму через 13 месяцев после инфицирования в A. tumefaciens из V. vinifera cv. Монастрель / cv. Гаме (G, H) и через 4 месяца после заражения Taxus x media (I).Полоса фотографий G = 67 мкм, H = 65 мкм и I = 149,82 мкм.

Молекулярная характеристика культуры клеток, трансформированных Vitis / Taxus

После 13 и 4 месяцев трансформации, соответственно, случайно выбранный трансгенный каллус Vitis и a Taxus , а также контрольный каллус дикого типа проверяли на интеграцию Т-ДНК в геном растения и генов EgfpER (и возможное заражение Agrobacterium ) путем ПЦР-амплификации с использованием пар праймеров, специфичных для EgfpER и virB.EgfpER присутствовал во всех трансгенных клонах (, фиг. 3A, ), но не в клонах дикого типа (, фиг. 3C, ), тогда как продукт ПЦР virB отсутствовал (, фиг. 3B, ). Эти результаты подтвердили, что трансгенные культуры действительно были трансформированы EgfpER и не были заражены Agrobacterium . В трансформированных клетках Vitis и Taxus , которые содержали GFP с сигнальной последовательностью ER, зеленая флуоресценция была распределена по всему эндоплазматическому ретикулуму ( рис.2G -2 I ). Обнаружение GFP в микросомальной фракции культур Vitis использовали для оценки синтеза рекомбинантного белка в трансгенных культурах. Мы смогли просмотреть полосы активного флуоресцентного белка в нативных гелях 1DE, используя подходящие длины волн возбуждения и излучения для GFP, соответственно 488 нм и 520 нм. Флуоресцентная полоса четко выделялась во фракции микросомального белка (, фиг. 4, ) трансформантов Vitis и Taxus, , но отсутствовала в нетрансформированных культурах.

Внеклеточное накопление стильбеноидов в культурах клеток, трансформированных виноградной лозой, при выявлении

После создания суспензионных культур трансгенных клеток Vitis , экспрессирующих GFP, определяли продуктивность стильбеноидов. Этот анализ включал транс, — и цис -изомеры ресвератрола, t -R и c -R, соответственно. Наша группа определила, что обработка клеточных суспензий V. vinifera cv.Гаме и cv. Монастрелл с MBCD в сочетании с MeJA приводил к значительному увеличению накопления t -R [22,58], поскольку t -R в большом количестве синтезировался в обработанных клетках и непрерывно перемещался в среду. Однако обработка MBCD + MeJA не приводила к синтезу de novo c -R, который был второстепенным метаболитом по сравнению с t -R. На фиг. 5 показано количество накопленных t -R во внеклеточной среде после 72 ч инкубации с элиситорами MBCD и MeJA, которые были количественно определены с помощью ВЭЖХ. t -R был обнаружен во внеклеточной среде во всех трансгенных клетках Vitis . Содержание t -R в трансгенной культуре сорта cv. Monastrell и cv. Гаме составил 1,13 ± 0,03 мг / мл и 2,62 ± 0,06 мг / мл соответственно. По сравнению с контролем сорта. Monastrell и cv. Gamay, 1,12 ± 0,06 мг / мл и 2,69 ± 0,04 мг / мл, соответственно, количество t -R существенно не изменилось в ответ на обработку MBCD + MeJA в трансгенных GFP-экспрессирующих клетках Vitis .Еще т. -R накоплено в вари. Культура клеток Гаме, чем у сорта cv. Монастрель. Эти результаты хорошо коррелируют с результатами, полученными Martinez-Esteso et al. [58] и Lijavetzky et al. [22] соответственно.

Рисунок 3 . Продукты ПЦР-амплификации геномной ДНК трансгенных линий клеток Vitis vinifera cv. Monastrell и cv. Gamay и Taxus x media . Амплификацию проводили с использованием праймеров, специфичных для EgfpER и virB. A. Продукты амплификации EgfpER из трансгенных линий Vitis vinifera cv. Монастрелль, cv. Gamay и Taxus x media . B. Продукты амплификации virB из трансгенных линий Vitis vinifera cv. Монастрелль, cv. Gamay и Taxus x media . Дорожки 1–3 — матрицы из трансгенных линий каллуса; дорожки 4–6 — матрицы трансгенных линий суспензий клеток. C. Продукты амплификации положительного контроля, полученные амплификацией линеаризованной плазмидной ДНК Agrobacterium и отрицательного контроля с использованием нетрансгенной геномной ДНК клеток Vitis и Taxus .PC1 и NC1 представляют собой ПЦР-амплификацию гена Egfp; PC2 и NC2 представляют собой ПЦР-амплификацию гена virB.

Рисунок 4 . Анализ электрофореза с использованием Native-PAGE экстрактов белков культур трансгенных клеток Vitis и Taxus . Флуоресценция GFP в геле из культуры трансгенных клеток, установленная из каллуса (дорожка 1–3) и суспензии клеток (дорожка 4–6). Отрицательный контроль (NC) с использованием нетрансгенной микросомальной фракции клеток Vitis и Taxus .Наблюдается единственная полоса около 38 кДа, соответствующая GFP. 30 мкг микросомальной белковой фракции загружали на дорожку.

Рисунок 5 . Накопление т -ресвератрол при элиситорной обработке клеток винограда сорта Монастрелл / Гаме в жидкой культуре. Содержание во внеклеточной среде в мг / мл культуры трансгенных клеток (1-6) и культуры нетрансгенных клеток (NT). 1–3, продукция т. -Ресвератрол из трансгенных линий каллуса; 4–6, продукция t -резвератрол из суспензионных трансгенных линий и NT, продукция t -ресвератрол из нетрансгенной клеточной культуры.Никаких значимых различий в столбцах не отмечено в результате непараметрического теста ANOVA Краскела – Уоллиса с P .

Обсуждение

Технологии генетической трансформации использовались для модификации широкого спектра сельскохозяйственных культур, включая полевые культуры, овощи и декоративные растения [59-61]. Однако использование таких технологий для успешной трансформации неэмбриогенных культур в целом и винограда и голосеменных растений в частности ограничено [41,56,62,63]. Мы сообщаем об успешной стабильной трансформации сорта Vitis vinifera cv.Гаме / cv. Monastrell и Taxus x media . В исследованиях трансформации в геном растения вводят селективные маркерные гены, обычно с представляющим интерес геном, чтобы обеспечить трансформированным клеткам преимущество в росте, чтобы перерасти нетрансформированные клетки в селекционной среде [64]. Установление селективного агента и концентрации — один из самых важных шагов. Канамицин использовался в качестве селекционного агента в культуре клеток Vitis [36,37]. Здесь мы получили высокую долю нетрансформированных побегов в Vitis , когда мы использовали канамицин в качестве селективного агента, даже в концентрации 500 мг / л.Продемонстрирована устойчивость культур клеток Taxus к канамицину [56]. Это побудило нас протестировать паромомицин, который также использовался в качестве селекционного агента в Vitis , трансформированном плазмидами, несущими NPTII [39]. Нетрансформированные побеги в Vitis и Taxus, , которые часто встречались при селекции канамицина, были устранены с использованием паромомицина в концентрации 60 мг / л, которая впоследствии была принята в качестве условия селекции.Стабильно трансформированные культуры клеток Vitis и Taxus были успешно получены посредством генетической трансформации, опосредованной Agrobacterium , в соответствии с описанным здесь протоколом. Предыдущий эксперимент по отбору Vitis был проведен в присутствии 1,5 мг / л поливинилпирролидона (ПВП), который не показал значительных различий по сравнению с отбором, проведенным без антиоксидантов (данные не показаны). Промывание в течение ночи культуры Agrobacterium в жидкой культуральной среде и доведение OD 600 до 0.1 для Vitis значительно уменьшил некротические эффекты совместного культивирования Agrobacterium , наблюдавшиеся ранее для V.vinifera [33,36,41], поэтому использование антиоксидантов было исключено. Taxus растительными клетками трудно манипулировать in vitro [65] , и стресс, вызываемый трансформацией, усложняет работу [66]. Скорректированное значение OD 600 , равное 0,4 для Taxus , было значительно ниже, чем 1.3 значение, используемое в Ketchum et al. [56]. T. x media выдержала инкубацию с Agrobacterium с небольшим заметным эффектом, в отличие от быстрого покраснения или потемнения, наблюдаемого в культурах T. x media или T. canadensis Ketchum et al. [56]. Трансформация, опосредованная Agrobacterium с помощью ультразвуковой обработки (SAAT) [67], была описана как простой и недорогой метод для значительного повышения эффективности у малочувствительных или нечувствительных видов растений.В этой работе культуры клеток обрабатывали ультразвуком для облегчения взаимодействия Agrobacterium- с растительными клетками [68]. Дальнейшее подтверждение интеграции Т-ДНК в геномы Vitis и Taxus было продемонстрировано с помощью ПЦР-анализа ( Рис. 3A ), и отсутствие контаминации Agrobacterium ( Рис. 3B ) в трансгенных культурах осталось. в непрерывной среде без паромомицина и цефотаксима. При конфокальной микроскопии зеленая флуоресценция GFP-экспрессирующих клеток Vitis и Taxus распределялась древовидным образом по эндоплазматическому ретикулуму.Обнаружение нативных флуоресцентных белков в гелях 1DE является дополнительным экспериментальным доказательством синтеза рекомбинантного белка в трансгенных культурах Vitis и Taxus (, рис. 4, ).
Оценки эффективности трансформации описаны в этом отчете; 20 и 17 трансформированных каллусов получали в среднем на 1 г сырой массы посева V. vinifera cv. Monastrell и cv. Gamay-клетки, соответственно, и не было обнаружено различий между исходным материалом (либо клеточной суспензией, либо каллусом), и было получено 10 трансформированных каллусов на 1 г свежей массы посеянных клеток Taxus c .Приблизительно 90–95% каллусов, трансформированных Vitis и 75% Taxus , успешно поддерживались при непрерывном отборе паромомицина. Эта высокая эффективность трансформации, насколько нам известно, является наилучшей из когда-либо зарегистрированных, поскольку предыдущие исследования предоставили доказательства только экспрессии репортерных генов, но не эффективности трансформации [41,69]. В отличие от предыдущей работы Голлопа и др. [41], работа, описанная здесь: (i) предоставляет прямые доказательства отсутствия контаминации Agrobacterium в трансгенных культурах V.vinifera , cv Gamay; (ii) исключает необходимость держать культуру под постоянным воздействием цефатаксима, за исключением первого периода отбора; и (iii) исключает необходимость использования антиоксидантов для противодействия стрессу культуры клеток на любой стадии процесса трансформации и отбора. Таким образом, описанный протокол имеет ряд значительных улучшений по сравнению с предыдущей работой.
Одним из узких мест на пути создания технологии культивирования клеток Vitis , пригодной для получения t -R, было создание подходящих условий выявления [21,22,58].До сих пор конститутивные промоторы обычно использовались для изучения эффектов экспрессии трансгена в растениях, но, учитывая тот факт, что конститутивная экспрессия генов может быть вредной для растения-хозяина, включая снижение урожайности [70,71 и ссылки в нем], эффект конститутивного воздействия GFP оценивали экспрессию на продукции t -R вызванной суспензией клеток виноградной лозы. Не было обнаружено значительного влияния на продукцию t -R ни в одной из различных трансгенных клеточных линий при сравнении введенных генов с нетрансформированным контролем, когда экстракты среды анализировали с помощью ВЭЖХ-МС ( фиг.5 ). Если трансгенные культуры клеток Vitis должны использоваться для крупномасштабного производства t -R, то эти культуры должны быстро расти как родительские клетки и должны стабильно экспрессировать интересующие гены в течение длительного времени, необходимого для увеличения масштаба. Трансгенные клетки не показали заметной разницы в росте клеток по сравнению с нетрансформированной родительской линией клеток. Наши результаты показывают, что можно получить и поддерживать быстро делящиеся трансгенные культуры суспензий трансгенных клеток Vitis и что интегрированные гены не обязательно влияют на рост или продуктивность ресвератрола по сравнению с родительским контролем.Очевидно, что на основе наших экспериментов по трансформации, в результате которых была получена стабильная трансгенная линия клеток Vitis , трансформация Vitis достижима. Создание технологии трансгенных клеток в Vitis является первым шагом к развитию метаболической инженерии пути биосинтеза стильбенов, чтобы лучше понять сложный путь и, в конечном итоге, улучшить производство t -R и производных. Поскольку рыночная цена таксанов и их производных высока, разработка модифицированных клеточных линий Taxus с улучшенной производительностью таксана является проблемой, с которой сегодня сталкиваются биотехнологии растений.Этот оптимизированный протокол может способствовать внедрению методов метаболической инженерии при производстве таксанов.

Благодарности

Эта работа поддержана грантами Министерства науки и инноваций Испании (BIO2011-29856-C02-01, BIO2011-29856-C02-02 и BIO2014-51861-R), Европейского фонда регионального развития (FEDER) и Conselleria. d’Educacio, Cultura I Sport de la Generalitat Valenciana (FPA / 2013 / A / 074). Мы с благодарностью принимаем за технический совет доктора Л. Бургоса.J.M.C. имеет постдокторский грант от SENESCYT-GOVERNMENT OF ECUADOR (006-IECE-SMG5-GPLR-2012).

Отчет о вкладе авторов

AMM участвовал в разработке эксперимента, проводил исследования, интерпретировал данные и написал статью. JMC и KRE внесли свой вклад в проведенное исследование. RMC, SSM, JP и MAP внесли свой вклад в экспериментальный дизайн и интерпретацию данных. RBM определила цели работы и технический подход, а также внесла свой вклад в экспериментальный дизайн и интерпретацию данных.Эта статья является частью докторской диссертации Асенсьона Мартинеса-Маркеса. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Ссылки

  1. Langcake P, Pryce RJ (1977) Новый класс фитоалексинов из виноградной лозы. Cell Mol Life Sci 33: 151-152. [PubMed] [Google Scholar]
  2. Langcake P, Pryce RJ (1977) Производство ресвератрола и виниферинов виноградными лозами в ответ на УФ-облучение. Phytochem 16: 1193–6. DOI: 10.1016 / S0031-9422 (00) 94358-9. [Просмотр статьи] [Google Scholar]
  3. Jeandet P, Douillet-Breuil A, Bessis R, Debord S, Sbaghi ​​M, et al.(2002) Фитоалексины из Vitaceae: биосинтез, экспрессия гена фитоалексина в трансгенных растениях, противогрибковая активность и метаболизм. J. Agric Food Chem. 50: 2731-2741. [PubMed] [Google Scholar]
  4. Pezet R, Cuenat P (1996) Ресвератрол в вине: извлечение из кожицы во время ферментации и пост-ферментационной выдержки сусла из винограда Гаме. Am J Enol Vitic 47: 287–90. [Google Scholar]
  5. Hall D, De Luca V (2007) Мезокарпийная локализация бифункциональной глюкозилтрансферазы ресвератрол / гидроксикоричная кислота винограда Конкорд (Vitis labrusca).Завод J 49: 579-591. DOI: 10.1111 / j.1365-313X.2006.02987.x. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  6. Pezet R, Gindro K, Viret O, Richter H (2004) Влияние ресвератрола, виниферинов и птеростильбена на подвижность зооспор Plasmopara viticola и развитие болезни. Vitis 43: 145–8. [Google Scholar]
  7. Bradamante S, Barenghi L, Villa A (2004) Сердечно-сосудистые защитные эффекты ресвератрола. Cardiovasc Drug Rev 22: 169-88. [PubMed] [Google Scholar]
  8. Le Corre L, Chalabi N, Delort L, Bignon Y, Bernard-Gallon DJ (2005) Ресвератрол и химиопрофилактика рака груди: молекулярные механизмы.Mol Nutr Food Res 49: 462-471. DOI: 10.1002 / mnfr.200400094. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  9. Wolter F, Ulrich S, Stein J (2004) Молекулярные механизмы химиопрофилактических эффектов ресвератрола и его аналогов при колоректальном раке: ключевая роль полиаминов. J Nutr 134: 3219-3222. [PubMed] [Google Scholar]
  10. Ratan HL, Steward WP, ​​Gescher AJ, Mellon JK (2002) Ресвератрол — химиопрофилактический агент рака простаты. Урол Онкол 7: 223-227. [PubMed] [Google Scholar]
  11. de la Lastra CA, Villegas I (2005) Ресвератрол как противовоспалительное и антивозрастное средство: механизмы и клинические последствия.Mol Nutr Food Res 49: 405-430. DOI: 10.1002 / mnfr.200500022. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  12. de la Lastra CA, Villegas I (2007) Ресвератрол как антиоксидант и прооксидант: механизмы и клинические последствия. Biochem Soc Trans 35: 1156-1160. DOI: 10.1042 / BST0351156. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  13. Baur JA, Pearson KJ, Price NL, Jamieson HA, Lerin C, et al. (2006) Ресвератрол улучшает здоровье и выживаемость мышей на высококалорийной диете.Природа 444: 337-342. DOI: 10,1038 / природа05354. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  14. Kaeberlein M, Rabinovitch PS (2006) Медицина: виноград против обжорства. Nature 444: 280-281. DOI: 10,1038 / природа05308. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  15. Накагава К., Фукуи Н., Табата М. (1986) Гормональная регуляция производства берберина в суспензионных культурах клеток Thalictrum minus. Rep клетки растений 5: 69-71. DOI: 10.1007 / BF00269722. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  16. Christen AA, Gibson DM (1991) Производство таксола или таксолоподобных соединений в культуре клеток.J. Производство таксола или таксолоподобных соединений в культуре клеток. В: Патент США 5019504; 1991. [Google Scholar]
  17. Шимомура К., Судо Х, Сага Х, Камада Х (1991) Производство и секреция шиконина культурами волосистых корней Lithospermum erythrorhizon. Rep клетки растений 10: 282-285. DOI: 10.1007 / BF001
  18. . [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]

  19. Vanisree M, ChenYue L, ShuFung L, Nalawade SM, ChienYih L и др. (2004) Исследования продукции некоторых важных вторичных метаболитов лекарственных растений культурами тканей растений.Bot Bull Acad Sin 45: 1–22. [Google Scholar]
  20. Фернандес-Перес Ф., Альмагро Л., Педреньо М.А., Гомес Рос Л.В. (2012) Синергетическое и цитотоксическое действие индольных алкалоидов, продуцируемых из вызванных культур клеток Catharanthus roseus. Фарм Биол 51: 304-310. DOI: 10.3109 / 13880209.2012.722646. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  21. Малик С., Кусидо Р.М., Мирджалили М.Х., Мояано Е., Паласон Дж. И др. (2011) Производство противоракового лекарственного препарата таксола в суспензионных культурах Taxus baccata: обзор.Process Biochem 46: 23–34. DOI: 10.1016 / j.procbio.2010.09.004. [Просмотр статьи] [Google Scholar]
  22. Bru R, Sellés S, Casado-Vela J, Belchí-Navarro S, Pedreño MA (2006) Модифицированные циклодекстрины представляют собой химически определенные глюкановые индукторы защитных реакций в культурах клеток виноградной лозы. J. Agric Food Chem. 54: 65-71. DOI: 10.1021 / jf051485j. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  23. Lijavetzky D, Almagro L, Belchi-Navarro S, Martínez-Zapater JM, Bru R, et al. (2008) Синергетический эффект метилджасмоната и циклодекстрина на экспрессию генов пути биосинтеза стильбена и продукцию ресвератрола в культурах клеток винограда Monastrell.BMC Res Notes 1: 132. DOI: 10.1186 / 1756-0500-1-132. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  24. Мартинес-Эстезо MJ, Sellés-Marchart S, Vera-Urbina JC, Pedreño MA, Bru-Martinez R (2009) Изменения защитных белков во внеклеточном протеоме культур клеток винограда (Vitis vinifera cv. Gamay) в ответ на элиситоры. J Proteomics 73: 331-341. DOI: 10.1016 / j.jprot.2009.10.001. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  25. Almagro L, Belchí-Navarro S, Sabater-Jara AB, Vera-Urbina JC, Selles-Marchart S (2013) Биопродукция транс-ресвератрола из культур клеток виноградной лозы.В: Рамават К.Г. и Мериллон Дж. М., редакторы. Справочник натуральных продуктов. Гейдельберг, Спрингер. pp 1683–1713. [Google Scholar]
  26. Lim CG, Fowler ZL, Hueller T, Schaffer S, Koffas MAG (2011) Производство высокодоходного ресвератрола в инженерных приложениях Escherichia coli. Environ. Microbiol 77: 3451-3460. DOI: 10.1128 / AEM.02186-10. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  27. Jeong YJ, An CH, Woo SG, Jeong HJ, Kim YM и др. (2014) Производство соединений пиностильбена путем экспрессии генов ресвератрол-O-метилтрансферазы в Escherichia coli.Enzyme Microb Technol 54: 8-14. DOI: 10.1016 / j.enzmictec.2013.09.005. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  28. Wang Y, Bhuiya MW, Zhou R, Yu O (2014) Производство птеростильбена микроорганизмами, экспрессирующими ресвератрол-O-метилтрансферазу. Анналы Microbiol 65: 817-826. DOI: 10.1007 / s13213-014-0922-z. [Просмотр статьи] [Google Scholar]
  29. Mei YZ, Liu RX, Wang DP, Wang X, Dai CC (2015) Биокатализ и биотрансформация ресвератрола в микроорганизмах. Biotechnol Lett 37: 9-18.[Google Scholar]
  30. Cusidó RM, Onrubia M, Sabater-Jara AB, Moyano E, Bonfill M и др. (2014) Рациональный подход к совершенствованию биотехнологического производства таксанов в культурах растительных клеток Taxus spp. Biotechnol Adv 32: 1157-1167. [Google Scholar]
  31. Чакрабарти Р., Банерджи Р., Чанг С., Фарман М., Цитовски В. и др. (2007) Векторы PSITE для стабильной интеграции или временной экспрессии слитых аутофлуоресцентных белков в растениях: исследование взаимодействий Nicotiana benthamiana-virus.Mol Plant Microbe Interact 20: 740-750. DOI: 10.1094 / MPMI-20-7-0740. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  32. Curtis MD, Grossniklaus U (2003) Набор векторов для клонирования Gateway TM для высокопроизводительного функционального анализа генов плантаций. Физиология растений 133: 462-469. [Google Scholar]
  33. Dubin MJ, Bowler C, Benvenuto G (2008) Модифицированная стратегия клонирования Gateway для сверхэкспрессии меченых белков в растениях. Растительные методы 4: 3. [Google Scholar]
  34. Perl A, Lotan O, Abu-Abied M, Holland D (1996) Создание системы трансформации, опосредованной Agrobacterium, для винограда (Vitis vinifera L.): роль антиоксидантов во взаимодействиях винограда и Agrobacterium. Nat Biotechnol 14: 624-628. DOI: 10.1038 / nbt0596-624. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  35. Видал Дж. Р., Гомес С., Кутанда М. С., Шреста Б. Р., Букет А и др. (2010) Использование технологии переноса генов для функциональных исследований в виноградной лозе. Aust J Grape Wine Res 16: 138-151. [Google Scholar]
  36. Jelly NS, Valat L, Walter B, Maillot P (2014) Тесты временной экспрессии в виноградной лозе: шаг к генетическому улучшению.Plant Biotechnol J 12: 1231-1245. DOI: 10.1111 / pbi.12294. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  37. Das DK, Reddy MK, Upadhyaya KC, Sopory SK (2002) Эффективный метод культивирования листовых дисков для регенерации посредством соматического эмбриогенеза и трансформации винограда (Vitis vinifera L.). Rep клетки растений 20: 999–1005. DOI: 10.1007 / s00299-002-0441-4. [Просмотр статьи] [Google Scholar]
  38. Iocco P, Franks T, Thomas MR (2001) Генетическая трансформация основных винных сортов винограда Vitis vinifera L.Transgenic Res 10: 105-112. [PubMed] [Google Scholar]
  39. Dutt M, Li ZT, Dhekney SA, Gray DJ (2008) Система совместной трансформации для получения трансгенных виноградных лоз, свободных от маркерных генов. Plant Sci 175: 201-213. DOI: 10.1007 / 978-1-61779-558-9_17. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  40. Vandelle E, Poinssot B, Wendehenne D, Bentéjac M, Alain P (2006) Интегрированная сигнальная сеть, включающая кальций, оксид азота и активные формы кислорода, но не активируемые митогеном протеинкиназы в BcPG1-индуцированной защите виноградной лозы.Mol Plant Microbe Interact 19: 429-440. DOI: 10.1094 / MPMI-19-0429. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  41. Gago J, Grima-Pettenati J, Gallego PP (2011) Сосудистая экспрессия репортерных генов GUS и GFP в трансгенной виноградной лозе (Vitis vinifera L. cv. Albariño), обеспечиваемая промотором EgCCR Eucalyptus gunnii. Physiol Biochem растений 49: 413-419. DOI: 10.1016 / j.plaphy.2011.02.005. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  42. Gollop R, Even S, Colova-Tsolova V, Perl A (2002) Экспрессия гена дигидрофлавонолредуктазы винограда и анализ его промоторной области.J Exp Bot 53: 1397-1409. [PubMed] [Google Scholar]
  43. Zapata JM, Calderon AA, Ros (1995) Barcelo A Изоферменты пероксидазы в культуре клеток, полученные из семядолей, стеблей, листьев и плодов виноградной лозы (Vitis vinifera cv.Monastrell. Annals of Botany 75: 443-448. Doi: 10.1006 / anbo.1995.1043. [Просмотр статьи] [Google Scholar]
  44. Cusidó RM, Palazón J, Navia-Osorio A, Mallol A, Bonfill M и др. (1999) Производство таксола и баккатина III отобранной каллусной линией Taxus baccata и полученной из нее суспензионной культурой клеток.Plant Sci 146: 101–107. DOI: 10.1016 / S0168-9452 (99) 00093-X. [Просмотр статьи] [Google Scholar]
  45. Cusidó RM, Palazón J, Bonfill M, Navia-Osorio A, Morales C и др. (2002) Улучшение продукции паклитаксела и баккатина III в суспензионных культурах среды Taxus x. Biotechnol Prog 18: 418–423. [Google Scholar]
  46. Widholm JM (1972) Использование диацетата флуоресцеина и феносафранина для определения жизнеспособности культивируемых растительных клеток. Пятно Технол 47: 189-194. [PubMed] [Google Scholar]
  47. Koncz C, Schell J (1986) Промотор гена Т, -ДНК S контролирует тканеспецифическую экспрессию химерных генов, переносимых новым типом бинарного вектора Agrobacterium.Mol Gen Genet 204: 383-396. DOI: 10.1007 / BF00331014. [Просмотр статьи] [Google Scholar]
  48. Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T (1989) Молекулярное клонирование: лабораторное руководство, 2-е изд. В кн .: Молекулярное клонирование: Лабораторное руководство, 2-е изд. Нью-Йорк: Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк. [Google Scholar]
  49. Maniatis T, Fritch EF, Sambrook J (1982) Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. В кн .: Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. Нью-Йорк: Пресса лаборатории Спринг-Харбора, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк.[Google Scholar]
  50. Batoko H, Zheng HQ, Hawes C, Moore I (2000) ГТФаза Rab1 необходима для транспорта между эндоплазматическим ретикулумом и аппаратом Гольджи и для нормального движения Гольджи у растений. Растительная клетка 12: 2201-2217. [PubMed] [Google Scholar]
  51. Martínez-Esteso MJ, Sellés-Marchart S, Lijavetzky D, Pedreño MA, Bru-Martínez R (2011) Количественный протеомный анализ развития и созревания ягод винограда, основанный на DIGE, выявляет ключевые события в метаболизме сахара и органических кислот.J Exp Bot 62: 2521-2569. DOI: 10.1093 / jxb / erq434. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  52. Raghupathi RN, Diwan AM (1994) Протокол оценки белка, который дает почти постоянный цветовой выход с простыми белками и сводит на нет эффекты четырех известных мешающих агентов: микрооценка пептидных групп. Анальная биохимия 219: 356-359. DOI: 10.1006 / abio.1994.1276. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  53. Yenofsky RL, Fine M, Pellow JW (1990) Мутантный ген неомицинфосфотрансферазы II снижает устойчивость трансформантов к давлению отбора антибиотиков.Proc Natl Acad Sci U S A 87: 3435-3439. [PubMed] [Google Scholar]
  54. Colby SM, Meredith CP (1990) Чувствительность к канамицину культивируемых тканей Vitis. Rep клетки растений 9: 237-240. DOI: 10.1007 / BF00232291. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  55. Torregrosa L, Lopez G, Bouquet (2000) Чувствительность виноградной лозы к антибиотикам: сравнение эффекта гигромицина и канамицина на развитие побегов трансгенного подвоя 110 Richter (Vitis Berlandieri x Vitis rupestris).S Afr J Enol Vitic 21: 32–39. [Google Scholar]
  56. Saporta R, De La Torre F, Segura A, Vidal JR (2014) Токсическое действие антибиотиков на виноградную лозу (Vitis vinifera ‘Albariño’) на прорастание эмбрионов и регенерацию трансгенных растений из суспензии эмбриогенных клеток. Vitis 53: 89–94. [Google Scholar]
  57. Ketchum REB, Wherland L, Croteau RB (2007) Стабильная трансформация и долгосрочное поддержание суспензионных культур трансгенных клеток Taxus. Rep клетки растений 26: 1025-1033. DOI: 10.1007 / s00299-007-0323-х. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  58. Trick HN, Finer JJ (1997) SAAT: трансформация, опосредованная Agrobacterium с помощью ультразвуковой обработки. Transgenic Res 6: 329-336. [Google Scholar]
  59. Martinez-Esteso MJ, Sellés-Marchart S, Vera-Urbina JC, Pedreño MA, Bru-Martinez R (2011) Анализ DIGE протеомных изменений, сопровождающих производство большого количества ресвератрола культурами клеток виноградной лозы (Vitis vinifera cv. Gamay) в ответ на метил -β-циклодекстрин и элиситоры метилжасмоната.J Proteomics 74: 1421-1436. DOI: 10.1016 / j.jprot.2011.02.035. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  60. Chandler SF, Sanchez C (2012) Генетическая модификация; создание трансгенных сортов декоративных растений. Plant Biotechnol J 10: 10-891. DOI: 10.1056 / NEJMoa1304839. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  61. Dale PJ (1995) Регулирование исследований и разработок и полевые испытания трансгенных культур. Trends Biotechnol. 13: 398–403. DOI: 10.1016 / S0167-7799 (00) 88988-X.[Просмотр статьи] [Google Scholar]
  62. Берч Р.Г. (1997) ПРЕОБРАЗОВАНИЕ ЗАВОДА: проблемы и стратегии практического применения. Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 48: 297-326. DOI: 10.1146 / annurev.arplant.48.1.297. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  63. Картикеян А., Пандиан С.К., Рамеш М. (2011) Опосредованная агробактериями трансформация каллусных тканей, полученных из основания листа, популярного риса индика (Oryza sativa L. sub sp. Indica cv. ADT 43). Plant Sci 181: 258-268.DOI: 10.1016 / j.plantsci.2011.05.011. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  64. Ishikawa M, Ishikawa M (2006) Трансформация суспензионных культур бромегаса (Bromus inermis) с помощью Agrobacterium tumefaciens. Культ растительной клетки Tiss Org 84: 293–299. DOI: 10.1007 / s11240-005-9037-3. [Просмотр статьи] [Google Scholar]
  65. Brasileiro ACM, Dusi DMA (1999) Transformação genética de plantas, в Cultura de Tecidos e Transformação Genética de Plantas, (Torres, A.C., Caldas, L.С., Бусо, Дж. ред.) Embrapa-SPI / Embrapa-CNPH, Бразилиа, Бразилия. pp 679–735. [Google Scholar]
  66. Ketchum REB, Гибсон Д.М. (1996) Производство паклитаксела в суспензионных культурах клеток Taxus. Культ растительной клетки Tiss Org 46: 9–16. [Google Scholar]
  67. Kim CH, Kim KI, Chung IS (2000) Экспрессия модифицированного зеленого флуоресцентного белка в суспензионной культуре Taxus cuspidata. Журнал Micro Biotech 10: 91–94. [Google Scholar]
  68. Liu Z, Park B, Kanno A, Kameya T (2005) Новое использование комбинации и вакуумной инфильтрации в опосредованной Agrobacterium трансформации фасоли (Phaseolus vulgaris) геном Lea.Мол Порода 16: 189-197. [Google Scholar]
  69. Trick WE, Kuehnert MJ, Quirk SB, Arduino MJ, Aguero SM и др. (1999) Региональное распространение устойчивых к ванкомицину энтерококков в результате межфункционального переноса колонизированных пациентов. J Infect Dis 180: 391-396. DOI: 10,1086 / 314898. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  70. Zhang P, Li ST, Liu TT, Fu CH, Zhou PP, et al. (2011) Сверхэкспрессия гена β-O-ацетилтрансферазы 10-деацетилбаккатин III-10 приводит к увеличению выхода таксола в клетках Taxus chinensis.Культ растительных клеток и тканей 106: 63–70. [Google Scholar]
  71. Kunkel T, Niu QW, Chan YS, Chua NH (1999) Индуцируемая изопентенилтрансфераза как высокоэффективный маркер трансформации растений. Nat Biotechnol 17: 916-919. DOI: 10,1038 / 12914. [Просмотр статьи] [PubMed] [Google Scholar]
  72. Cai M, Wei J, Xianghua L, Caiguo X, Shiping W (2007) Промотор риса, содержащий как новые положительные, так и отрицательные цис-элементы для регуляции экспрессии генов, специфичных для зеленой ткани в трансгенных растениях.Plant Biotechnol J 5: 664-674. [Google Scholar]
  73. Карими М., Инзе Д., Депикер А. (2002) векторы GATEWAY для опосредованной Agrobacterium трансформации растений. Trends Plant Sci 7: 193-195. [PubMed] [Google Scholar]

Дополнительная информация

Рисунок S1 . Анализы для определения подходящего селекционного агента в культуре клеток Vitis.

Рисунок S2 . Нетрансформированные клетки из сред Monastrell, Gamay и Taxus x (A, B, C соответственно) через 4 недели в среде для отбора.

Дополнительную информацию к этой статье можно найти в Интернете по адресу https://www.jbmethods.org.


Это произведение находится под лицензией Creative Commons Attribution 3.0 License.

Современное состояние биотехнологии виноградной лозы и новые технологии селекции (NBTS)

Абстрактные

Контекст обзора: Манипуляции с генетической основой, контролирующей адаптацию виноградной лозы и фенотипическую пластичность, могут быть выполнены либо с помощью классической генетики, либо с помощью биотехнологий.За последние 15 лет накоплен значительный объем знаний о геноме виноградной лозы, а также о механизмах взаимодействия винограда с окружающей средой, вредителями и болезнями. Несмотря на трудности, связанные с генетическим картированием у этого вида (разнообразие аллелей, химеризм, большие интервалы между поколениями …), было идентифицировано несколько основных контролирующих важных вегетативных или репродуктивных признаков. Учитывая огромное генотипическое и фенотипическое разнообразие, существующее в Vitis , селекция предлагает широкий спектр возможностей для улучшения характеристик сортов.Однако, даже если селекция с помощью маркеров была в значительной степени разработана для сокращения программ селекции, отбор улучшенных сортов, будь то по агрономическим признакам или устойчивости к болезням, все еще остается долгим и неопределенным. Более того, селекция путем скрещивания не сохраняет генетический фон сорта, в то время как винная промышленность и рынок по-прежнему основаны на сортовых винах.
Значение обзора: В области виноградных лоз в 1960-х годах были созданы новаторские биотехнологии для размножения и / или очистки материала от микроорганизмов.В 1990-х годах основы генной инженерии были заложены в первую очередь с помощью биолистики или Agrobacterium с несколькими производными технологиями, усовершенствованными за последние 10 лет. Последнее достижение представлено группой технологий, основанных на редактировании генома, которые позволяют более точно модифицировать геном. Эти технологии, так называемые NBT ( новых селекционных технологий ), которые теоретически не разрушают фенотип существующих сортов, потенциально могут быть лучше приняты винной промышленностью и потребителями, чем предыдущие подходы к ГМО ( генетически модифицированных организмов ).В этой статье рассматривается текущее состояние биотехнологий, доступных для манипуляции геномом виноградной лозы, и будущие перспективы генетического улучшения.

Введение — Что означает биотехнология виноградной лозы?

Термин биотехнология относится к любому процессу культивирования, размножения или генетической модификации, в котором используются методы или условия реализации, не существующие в природе (Torregrosa and Bouquet, 1993). Таким образом, этот термин может применяться к большому количеству технологий, используемых для размножения, отбора элитных особей или изменения их санитарного или генетического статуса.Биотехнологии можно разделить на три категории. Первый включает все методы, используемые для сохранения или размножения (например, in vitro, микроразмножение для создания коллекций сортов в асептических условиях). Вторая категория связана с набором методов, которые поддерживают санитарный (например, микротрансплантацию) или генетический (например, спасение эмбриона) отбор элитных особей, не вызывая генетических модификаций. В последнюю категорию входят технологии, модифицирующие геном или эпигеном (например,грамм. сомаклональная вариация или in vitro ( мутагенез, генетическая трансформация или недавнее редактирование генома), которые можно использовать для модификации структуры или функционирования гена.

История биотехнологий виноградной лозы

Первые отчеты (, таблица 1, ), посвященные применению биотехнологии виноградной лозы, принадлежат Жоржу Морелю (1944). Эти ранние работы касались культуры in vitro тканей в асептических условиях (Torregrosa et al., 2001; Букет и Торрегроса, 2003 г.). Как только были разработаны первые культуральные среды in vitro , первые приложения заключались в определении условий развития тканей или органов на основе ранее существовавших меристем для целей размножения. С 1970-х по 80-е годы эти методы позволили разработать процедуры очистки от вирусов и использовать размножение in vitr o для вегетативного и генетического улучшения разновидностей подвоев и привоев.

Таблица 1.Биотехнологии виноградной лозы (выделены крупные достижения).

Достижение

Номер ссылки

Асептическая культура тканей

Морель (1944)

Микроразмножение

Галзы (1961)

Культура изолированной меристемы

Галзы (1972)

Соматический эмбриогенез

Маллинс и Шринивасан (1976)

Адвентивный органогенез

Фавр (1977)

Разрастание пазушных почек

Йона и Уэбб (1978)

Придаточный каулогенез

Раджасекаран и Маллинз (1981)

Машинные корни

Guellec et al. (1990)

Трансгенные лозы

Mullins et al. (1990)

Бомбардировка частицами

Hébert et al. (1993)

Манипуляции с агрономическими признаками

Le Gall et al. (1994)

Технология Protoplast

Reustle et al. (1994)

Диссоциация клеточного слоя L1 / L2

Franks et al. (2002)

Экспрессия клеточной суспензии

Torregrosa et al. (2002)

Трансгенный органогенез

Mezzetti et al. (2002)

Минимальная кассетная техника

Видал et al. (2006)

Вирус, вызывающий молчание гена

Муруганантам et al. (2009)

Преобразование микролозы

Chaib et al. (2010)

Мутагенез CRISPR / Cas9

Ren et al. (2016)

Генетическая версия без ДНК

Малной и др. (2016)

С 1980-х годов, благодаря достижениям в понимании гормонального контроля органогенеза растений, были разработаны методы регенерации, чтобы вызвать дифференциацию меристем побегов от недифференцированных клеток. Первые соматические регенерации были получены путем адвентивного органогенеза, то есть путем индукции развития новообразований (Barlass, Skene, 1978). Параллельно соматический эмбриогенез был разработан для большого числа генотипов Vitis (Martinelli and Gribaudo, 2001).Последняя технология, позволяющая получить тысячи соматических эмбрионов из нескольких сотен мг каллусов или суспензий эмбриогенных клеток, лежит в основе процедур генетической трансформации или редактирования генома.

В первой публикации, в которой упоминается успешный перенос генов в виноградной лозе, сообщалось об извлечении каллусов и корней, трансформированных плазмидами, производными Agrobacterium tumefaciens (Hemstad and Reisch, 1985). Baribault et al. (1989) получил вегетативные органы Каберне Совиньон, эктопически экспрессирующие трансгены, но не смог добиться регенерации стабильных растений.Первые трансгенные лозы были получены Mullins et al. (1990), который соединил трансформацию с помощью векторов, обезвреженных Agrobacterium , с регенерацией подвоев соматическим эмбриогенезом. Первая попытка включить гены, представляющие агрономический интерес, была предпринята несколько лет спустя Le Gall et al. (1994), который включил ген, кодирующий белок оболочки GCMV (вирус хромовой мозаики виноградной лозы) в подвои и межвидовые гибриды Vitis x Muscadinia .

За прошедшие годы технология переноса генов была усовершенствована и применена к ряду видов Vitis (Bouquet и др. , 2006 г .; Bouquet и др. , 2008 г .; Torregrosa и др. , 2015 г.) . Agrobacterium -опосредованная трансформация также была разработана для микровинии (Chaib et al. , 2010), что является многообещающей моделью для ускорения физиологических и генетических исследований виноградной лозы (Torregrosa et al. , 2016). Однако, несмотря на многие улучшения, регенерация нехимерных трансгенных растений остается долгим и сложным процессом для многих генотипов виноградной лозы.Тем не менее, различные альтернативные методы с использованием физических векторов или вирусов были разработаны для получения эктопической экспрессии генов в отдельных клетках, культурах клеточных суспензий, тканях или других органах (Vidal et al. , 2010).

В последнее время методы генетической модификации значительно улучшились с развитием подходов к редактированию генома. Эти технологии, в частности технологии, основанные на CRISPR / Cas9, используют эндонуклеазы, которые изменяют структуру и экспрессию генов более специфическим и целенаправленным образом, чем предыдущие технологии.Что касается виноградной лозы, первое доказательство концепции было предоставлено Ren et al. (2016), который изменил метаболизм винной кислоты путем мутации фермента L-идонатдегидрогеназы (IdnDH) Шардоне. С тех пор несколько исследовательских групп пытались разработать технологию для индукции генетических модификаций без включения вирусных или бактериальных генетических основ. Эти новые технологии представляют интересные перспективы как для исследований функциональной геномики, так и для генетического улучшения виноградной лозы (Dalla Costa et al., 2017). Эти технологии подробно описаны в следующих разделах.

Размножение и сохранение исконных ресурсов

Надежное размножение генотипов виноградной лозы, то есть без морфогенетических изменений, не может быть достигнуто соматической регенерацией из-за высоких уровней регуляторов роста, которые необходимы для поддержания этого статуса, также потенциально могут вызывать соматические вариации или мутации. Кроме того, регенерируя индивидуума из одной клетки или небольшого количества клеток, процесс регенерации изменяет генетическую структуру химерных генотипов (Torregrosa et al., 2011). Таким образом, размножение in vitro лучше всего достигается с помощью микрорезки, метода, который не требует использования регуляторов роста растений (Galzy, 1961). Каждая почка развивается в единую вегетативную ось, производящую 2-4 фитомера в месяц. Годовое теоретическое производство может достигать 10 3 растений в зависимости от сорта ( Рисунок 1 ). Другой метод, так называемое подмышечное микроразмножение, требует использования цитокининов для подавления апикального доминирования и индукции пролиферации подмышечных отростков (Silvestroni, 1981).Поскольку гормональный баланс, установленный для получения подмышечных пролиферационных масс, ингибирует ризогенез, укоренение побегов, выделенных из пролиферационных масс, требует дополнительного этапа с использованием среды, обогащенной ауксином (IAA, IAB или NAA). По этой методике теоретически можно получить от одной бутоны более 10 4 растений в год.

Рис. 1. Размножение через микрочанки (вверху) или подмышечные разрастания (внизу).Справа вверху — одномесячный росток, выросший на микрорезке. Справа внизу — микропролиферативная масса до и после отделения побегов.

Создание генетической зародышевой плазмы, поддерживаемой путем микроразмножения, является альтернативой существующим хранилищам в теплицах или на открытом воздухе, подвергая генотипы биотическим и абиотическим рискам. Однако основным недостатком репозиториев in vitro является стоимость субкультур.Чтобы уменьшить частоту субкультивирования за счет уменьшения роста растений in vitro и , было опробовано несколько подходов, например снижение температурных условий с использованием питательных сред без сахара или ингибиторов роста растений, таких как хлорхолин хлорид (Galzy, 1985; Harst-Langenbucher and Alleweldt, 1990). Все эти системы могут быть успешно применены к большому сортовому (генотипическому) диапазону. Напротив, криоконсервация верхушки или почек, которая также была исследована, применима только к ограниченному числу генотипов и с низким уровнем воспроизводимости (Plessis et al., 1991; Маркович и др. , 2015).

Вегетативный генетический или санитарный отбор

Для получения генетически однородных и свободных от вирусов сортов в большинстве стран выполняется клональное размножение (Mannini, 2000). Первым предложенным методом для уничтожения вирусов была in vitro термотерапия (Galzy, 1963). Культура меристем и соматический эмбриогенез также описаны как эффективные методы уничтожения вирусов виноградной лозы (Goussard, 1981; Goussard et al., 1991), и было показано, что они зависят от штамма вируса и генотипа виноградной лозы. На сегодняшний день наиболее широко используемый метод заключается в трансплантации верхушки побега (200-500 мкм) на in vitro междоузлий растений или на гипокотильных фрагментах скулового или соматического зародыша (Bass et al. , 1976; Torres-Viñals и др. , 2004). Термотерапия может проводиться в сочетании с культивированием меристемы, микротрансплантацией верхушки или соматическим эмбриогенезом для повышения эффективности элиминации вируса (Gribaudo et al., 2006; Maliogka et al. , 2015). Некоторые авторы показали, что вирусная нагрузка может быть снижена на этапах криоконсервации (Wang et al. , 2003), но этот подход все еще исследуется. Следовательно, существует ряд методов, которые могут быть реализованы в клональных и санитарных программах древних и / или редких сортов, поскольку определенный процент идентифицированных селекций систематически заражен одним или несколькими штаммами вируса.

In vitro методы спасения эмбрионов ( Рисунок 2 ) также используются для поддержки создания генетически сегрегационных популяций, особенно когда родители обладают: et al., 1990) или ii) мутации Vvgai1 , которая усиливает покой покровов семян (Chatbanyong and Torregrosa, 2015). Различные технологии стимулирования развития зиготического эмбриона, извлеченного из оплодотворенного яичника, известны как спасение эмбриона (Sharma et al. , 1996; Ramming et al. , 2000). Эффективность спасения эмбрионов можно оптимизировать путем выбора конкретных стадий развития плода после цветения (Pommer et al. , 1995), типа и уровня регуляторов роста (Agüero et al., 2000) и предшественников (Hewstone et al. , 2006). Эти технологии, которые сейчас широко используются в программах селекции столового винограда, обеспечивают процент прорастания до 50% (Hewstone et al. , 2006). Применительно к скрещиваниям с участием родителей микролоз, спасение эмбрионов приводит к очень высокой скорости прорастания, особенно когда эмбрионы извлекаются на ранней стадии развития ягод (Chatbanyong and Torregrosa, 2015).

Рисунок 2.Спасение зиготных зародышей для восстановления особей от скрещиваний бессемянных сортов.

Временная или стабильная трансформация клеток и органов

1. Стратегии и инструменты клонирования

Молекулярное клонирование — фундаментальный этап генной инженерии. Это относится к процессу, посредством которого молекулы ДНК / РНК производятся и трансформируются в организм-хозяин. Обычно он состоит из следующих компонентов: i) представляющий интерес фрагмент ДНК, который необходимо вставить, и ii) каркас принимающего вектора / плазмиды, который содержит все компоненты для репликации в хозяине.Каждый компонент (вставка и вектор) будет проходить через серию подготовительных этапов, необходимых для создания конечной кассеты (вставка + вектор), которая будет перенесена в организм-хозяин с помощью процедуры трансформации . Существует несколько доступных стратегий либо для проведения одного события вставки, либо для сборки нескольких модулей ДНК (, таблица 2, ).

Традиционное клонирование обычно относится к использованию эндонуклеазы рестрикции для создания фрагментов ДНК с комплементарными концевыми последовательностями, которые могут быть соединены вместе с ферментом ДНК-лигазой.Обычно это включает подготовку как вставки, так и вектора путем разрезания двумя уникальными рестрикционными ферментами. Использование двух рестрикционных ферментов, которые генерируют два несовместимых конца, приводит к направленному клонированию вставки в вектор, тем самым снижая фон трансформации для событий самолигирования вектора. Открытие полимеразной цепной реакции (ПЦР) расширило использование рестрикционного клонирования до ПЦР-клонирование путем введения сайтов рестрикции, необходимых для реакции лигирования с вектором в конце вставки, амплифицированной ПЦР.

Таблица 2. Краткое изложение физических и химических методов доставки ДНК (из Cunningham et al. , 2018).

Способ доставки

Побочные эффекты

Цели

Виды грузов

Ограничения

Физические методы

Биолистическая
или опосредованная частицами доставка

— Повреждение тканей и груза-мишени

Калли, зародыши, листья

ДНК, миРНК, миРНК, рибонуклеопротеины, большой размер

— Эффективность высоко видовая и специфическая для сорта

— Малая глубина проникновения

— Таргетинг оставляет ограниченное время для наблюдения за эффектами доставки

— Случайная интеграция

— Ориентация на эмбрионы требует трудоемкой процедуры регенерации

Электропорация

— Повреждение ткани-мишени

— Протопласты

Нуклеиновые кислоты (ДНК, миРНК, миРНК)

Ограниченная грузоподъемность

— Неспецифический перенос материала через поры

— Meristems

— Может привести к неправильной функции клеток

— Пыльцевые зерна

Химические методы

PEG-опосредованная доставка

Высокая плотность может вызвать цитотоксичность.

— Виды, способные к регенерации протопластов

Нуклеиновые кислоты (ДНК, миРНК, миРНК)

Регенерация неэффективна для большинства видов в временных исследованиях

— Протопласты

В последние годы метод бесшовного клонирования привлек внимание ученых, поскольку он обеспечивает независимую от последовательности вставку одной или нескольких вставок в вектор.Рабочий процесс включает ПЦР для амплификации интересующего гена, экзонуклеазу, генерирующую когезионные концы для вставки и вектора, а также лигазу или рекомбиназу для присоединения вставки к вектору. Возможность соединять от 5 до 10 фрагментов в заданном порядке без каких-либо ограничений последовательности или артефактов является очень привлекательным и мощным инструментом в свете синтетической биологии. Самым популярным методом является метод сборки Gibson , разработанный Gibson et al. (2009). Эта рекомбинация in vitro и представляет собой одностадийную изотермическую реакцию с использованием 5’-экзонуклеазы (образование выступающих концов), полимеразы для заполнения пробелов в отожженных одноцепочечных областях и ДНК-лигазы для закрытия зазоров.

Сборка Golden Gate — это еще один подход к бесшовному клонированию, в котором используется использование рестрикционных ферментов типа IIS для расщепления ДНК за пределами сайта узнавания (Engler et al. , 2008; Engler et al. , 2009 г.). У этой методологии есть несколько преимуществ. Во-первых, создаваемая выступающая последовательность не диктуется рестрикционным ферментом, и дополнительная ДНК не вводится. Во-вторых, специфическая для фрагментов последовательность выступов позволяет сборку нескольких фрагментов в определенном последовательном порядке.В-третьих, сайт рестрикции удаляется из лигированного продукта, поэтому реакции переваривания и лигирования могут происходить одновременно. Оба метода (Гибсон и сборка Golden Gate) были недавно описаны для виноградной лозы как часть стратегии клонирования, направленной на создание TAS3-устойчивой конструкции гена ARF4 и амиРНК (искусственная микроРНК), нацеленная на эндогенный ген ARF4 (Gouthu et al. , 2018).

За последнее десятилетие рекомбинационное клонирование стало очень популярным в генной инженерии растений с использованием интеграз или рекомбиназ, которые позволяют переносить фрагмент ДНК из одного вектора в другой без использования рестрикционных ферментов и лигаз.Технологии многоэтапных шлюзов (рекомбиназа) могут обеспечивать доставку множества трансгенов посредством множественных реакций (Vemanna et al. , 2013), но они оставляют артефакт ДНК длиной 21 п.н. между строительными блоками. Тем не менее, комбинация вектора входа Golden Gate вместе с системой рекомбинации Gateway становится чрезвычайно полезной как часть подходов к мультиплексному редактированию генома растений и регуляции транскрипции с использованием CRISPR / Cas9 (Lowder et al. , 2015).

По общему мнению, технология Golden Gate не подлежала повторному использованию и, следовательно, не годилась для мультигенной инженерии ( модульное клонирование ).Были созданы две новые стратегии сборки ДНК, чтобы обеспечить возможность повторного использования, например, схемы клонирования Golden Gate: Moclo (Weber et al. , 2011) и GoldenBraid (Sarrion-Perdigones et al. , 2011). Обе стратегии используют свойство Golden Gate для построения единиц транскрипции (TU) и проектирования векторов назначения, которые позволяют объединять TU между собой. Эти две стратегии выгодны для разработки модульных сборочных систем в синтетической биологии растений, если обществом принимаются общие стандарты, так что строительные блоки могут использоваться как можно большим количеством пользователей (Vazquez-Vilar et al., 2017).

Наконец, Клонирование, независимое от лигирования (LIC) — это метод, альтернативный клонированию рестрикционного фермента / лигазы (Aslanidis and de Jong, 1990). Вставки амплифицируют с помощью ПЦР, а векторы делают линейными либо путем переваривания рестриктазой, либо с помощью ПЦР. Использование 3 ’→ 5’ экзонуклеазной активности ДНК-полимеразы Т4 создает выступы с комплементарностью между вектором и вставкой. Включение dGTP в реакцию ограничивает процессинг экзонуклеазой до первого комплементарного остатка C, что облегчает образование продуктов ПЦР с липкими концами, комплементарных вектору.Объединенные фрагменты (вставка + вектор) имеют четыре разрыва, которые репарируются с помощью E. coli во время трансформации. Этот метод позволяет эффективно создавать рекомбинантные плазмиды без введения артефактов ДНК. Один конкретный вариант клонирования, независимого от лигирования, — метод SLIC для клонирования , независимого от последовательности и лигирования, — был принят многими исследователями. За одну реакцию можно собрать до пяти вставок одновременно с большой эффективностью (Li and Elledge, 2012).Более маргинальным, но все же эффективным является реагент для удаления урацила Fusion (Geu-Flores et al. , 2007), который состоит из использования праймеров для ПЦР, которые содержат единственный остаток дезоксиуридина около 5 ’конца. Последующая обработка продуктов ПЦР реагентами для удаления дезоксиуридина приводит к образованию длинных 3 ’выступов, которые дополняют друг друга и тем самым способствуют их слиянию. Комбинация этого подхода с улучшенными методами клонирования привела к разработке эффективного инструментария для трансформации зерновых (Hebelstrup et al., 2010 г.).

2. Физико-химические способы доставки

Biolistic , также называемый бомбардировкой частицами (, таблица 3 ), представляет собой физический метод, разработанный в 1980-х годах, предназначенный для доставки в растительные клетки микрочастиц (золота или вольфрама), покрытых генетическим грузом, содержащим интересующую генетическую информацию ( Klein и др. , 1987). В отличие от трансформации, опосредованной Agrobacterium , биолистическая доставка может приводить к трансформации ядерного, пластидиального или митохондриального генома.Однако его эффективность сильно зависит от вида / сорта, что делает его воздействие очень ограниченным. Природа и размер генетического груза эволюционировали вместе с технологическими достижениями генной инженерии. Было продемонстрировано, что ДНК, миРНК (малые интерферирующие РНК), миРНК, рибонуклеопротеины (РНП) эффективно переносятся с помощью биолистических методов, хотя плазмидная ДНК остается наиболее распространенным генетическим материалом, передаваемым этим способом.

Биолистические эксперименты проводились на виноградной лозе в конце 1990-х — начале 2000-х годов.В 1996 году Kikkert et al. сообщил о первом поколении трансгенных растений виноградной лозы с использованием Vitis Hybrid Chancellor. Позже Vidal et al. (2003) адаптировал надежную и эффективную систему для стабильной трансформации и регенерации растений сорта «Шардоне» с использованием бомбардировки микрочастицами. В виноградной лозе биолистический метод также оказался чрезвычайно популярным для временных анализов на различных растительных материалах (культуре клеточной суспензии, срезах листьев и соматических зародышах).Анализ промотора в суспензионных клетках Каберне Совиньон оказался успешным при изучении эффекта анаэробиоза на регуляцию экспрессии гена VvAdh (Torregrosa et al. , 2002). Эксперименты по совместной трансформации с использованием GFP ( зеленый флуоресцентный белок ), GUS ( бета-глюкуронидаза ) и люциферазы для проверки взаимодействий белок-ДНК обычно проводились для изучения трансактивации факторов транскрипции MYB и MYC на промоторах несколько генов, связанных с флавоноидами (Bogs et al., 2007; Уокер и др. , 2007; Deluc et al. , 2008 г .; Czemmel et al. , 2009 г .; Hichri et al. , 2010 г.). Совсем недавно анализ делеции промотора VitViGIP1 был выполнен на дисках листьев и соматических зародышах и выявил основной промотор этого гена и несколько других цис-действующих регуляторных элементов (Joubert et al. , 2013).

Электропорация — Первоначально разработанная для трансформации протопластов, эта технология была распространена на интактные растительные клетки риса и пшеницы (Shimamoto et al., 1989; He et al. , 1994). Этот принцип требует приложения сильного электрического поля к клеткам, которое создает временные поры в клеточных мембранах, тем самым облегчая поглощение генетического груза клеткой. В последнее десятилетие протоколы электропорации для трансформации растений были оптимизированы и стандартизированы для нескольких видов растений (включая табак, рис, пшеницу и кукурузу) с использованием коммерчески доступных электропораторов (Barampuram and Zhang, 2011). Хотя методология является быстрой и недорогой, она имеет некоторые ограничения, такие как толщина клеточной стенки и воздействие импульса сильного электрического поля, которое может повредить структуру доставленного гена, создавая неточные конечные продукты трансляции (Rakoczy-Trojanowska, 2002).На сегодняшний день нет исследований с использованием этого метода в генетических исследованиях виноградной лозы.

Таблица 3. Преимущества и недостатки методов клонирования и сборки.

Метод клонирования

Преимущество

Недостаток

Традиционный

Низкая стоимость

Ограничения последовательности из-за присутствия и / или трансляции сайта рестрикции

Универсальный

Направленное клонирование

PCR

Высокая эффективность
Высокая производительность

Ограниченный выбор векторов

Более высокая стоимость

Отсутствие контроля последовательности на стыке

Направленное клонирование может быть затруднено

Бесшовные

Конечная последовательность не продиктована
рестрикционным ферментом

Низкая эффективность клонирования может потребовать использования
для сверхкомпетентных химически компетентных клеток

Позволяет упорядоченную сборку
нескольких фрагментов одновременно

Рекомбинационный

Позволяет создавать векторы с высокой пропускной способностью

Относительно дороже
по сравнению с традиционными методами

Широко доступные коллекции ORF

Наборы векторов, определенные поставщиком

Клонирование, не зависящее от лигирования

Низкая стоимость

Некоторые модификации последовательности невозможны

Выбор множества различных векторов

ПЭГ-опосредованная трансформация использует инертный гидрофильный полимер этиленоксида, который может способствовать переносу ДНК в протопласты.В этом подходе молекулы ДНК непосредственно инкубируются с протопластами, и перенос инициируется добавлением к смеси двухвалентных катионов. Добавление ПЭГ к смеси протопластов дестабилизирует проницаемость мембраны растения и позволяет свободной ДНК проникать в цитоплазму растения. С одной стороны, отсутствие эффективной техники и методологии регенерации целых растений из протопластов делает использование PEG-опосредованной системы доставки для трансформации зрелых растений маргинальным.С другой стороны, он широко используется для временных анализов на растениях для проверки функции генов. В виноградной лозе обработанные ПЭГ протопласты из суспензионных культур клеток Каберне Совиньон использовали для изучения субклеточной локализации белка (Hichri et al. , 2010), анализа промотора (Saumonneau et al. , 2012), белка / белка (Saumonneau et al. , 2008) и взаимодействия ДНК / белка (Marchive et al. , 2013). Совсем недавно ПЭГ-опосредованная трансформация протопластов Шардоне была использована в качестве предпочтительного метода прямой доставки очищенных РНП CRISPR / Cas9 (Malnoy et al., 2016).

3. Технологии на основе агробактерий

Среди различных методов генетической трансформации растений, Agrobacterium- опосредованные технологии описаны как мощные инструменты для доставки представляющих интерес генов в растение-хозяин. Несмотря на техническую сложность, эти подходы, опосредованные Agrobacterium , по-прежнему предпочтительны для производства трансгенных растений, поскольку они обладают рядом преимуществ: они позволяют i) переносить большие и интактные сегменты ДНК, ii) вставлять простые трансгены с определенными концами и низкое количество копий, iii) стабильная интеграция и наследование, и iv) постоянная экспрессия генов на протяжении поколений (Barampuram and Zhang, 2011).

Методы трансформации, опосредованной Agrobacterium- , делятся на две категории: стабильная трансформация и временная трансформация. Стабильная трансформация происходит, когда ДНК, перенесенная внутри ядра растения, вставляется в геном растения для наследования последующим поколениям. Альтернативно, временная трансформация относится к ситуации, в которой чужеродная ДНК временно остается в ядре, не интегрируясь в геном растения, но транскрибируется для экспрессии интересующих генов.В виноградной лозе эти методы переноса генов, опосредованные Agrobacterium , были разработаны в начале 1990-х годов (Baribault et al. , 1989) и постоянно совершенствовались, чтобы дать возможность охарактеризовать функцию и регуляцию нескольких генов (, таблица 4, ). .

Основным штаммом Agrobacterium , используемым для трансформации винограда, является A. tumefaciens , но использование штаммов A. rhizogenes для трансформации корней (волосистых корней) также обеспечивает интересную систему для проведения функциональных исследований (Hu and Du, 2006 г.).Наиболее часто штаммов A. tumefaciens , используемых для трансформации виноградной лозы, являются EHA105 (Hood et al. , 1993), GV3101 (Koncz and Schell, 1986) и C58C1 (Hamilton et al. , 1996).

Стабильные методы трансформации Стабильная трансформация виноградной лозы — длительный и иногда трудный процесс. Его эффективность сильно зависит от генотипа, источника эксплантата, состава среды и используемого метода трансформации.Совместное культивирование соматических зародышей с A. tumefaciens является наиболее часто используемым методом стабильной трансформации виноградной лозы. Он широко использовался для подтверждения концепции (Torregrosa et al. , 2002; Chaib et al. , 2010; Ren et al. , 2016) и функциональной характеристики предполагаемых ключевых генов (Lecourieux et al. др. , 2010; Ли и др. , 2012; Николас и др. , 2013, 2014; Пессина и др. , 2016; He и др., 2018; Sun et al. , 2018).

Поскольку регенерация трансгенных растений из стабильно трансформированных эмбрионов длится долго, функция генов также может быть решена с использованием определенных органов растений. В этом отношении трансгенные волосатые корни, индуцированные A. rhizogenes , представляют собой мощную систему для функциональных исследований (Hu and Du, 2006; Gomez et al. , 2009; Terrier et al. , 2009; Höll et al. , 2013), так как их изготовление занимает всего несколько недель (Torregrosa and Bouquet, 1997).

Таблица 4. Примеры анализов трансформации, опосредованной Agrobacterium (модифицировано из Jelly et al. , 2014).

Метод

Ткань

Сорт

Штамм

Заявка

Гены / сек.

Список литературы

Проникновение в шприц

Листья in vitro проростков

Высший бессемянный

AGL1, GV3101

Подавление гена

hpRNA против VvPDS

Урсо и др. .(2013)

Вакуумная инфильтрация

Листья in vitro проростков

Thompson без косточек

Каберне Фран, Сира, Зинфандель

C58C1 (pCh42)

EHA105

Сверхэкспрессия

Инженерия вирусных векторов

D4E1 (синтетический AMP)

кДНК GLRaV ‐ 2

Visser et al .(2012)

Курт и др. . (2012)

Отдельные листья in vitro проростков

Каберне Фран

Каберне Совиньон, Сенсо, Мускат

GV3101

C58C1 (pCh42)

Подавление гена

Сверхэкспрессия

hpRNA против VvPGIP1

VvVST1

Bertazzon и др. .(2012)

Сантос-Роса и др. . (2008)

Кариньян

GV3101

LBA4404

Сверхэкспрессия

Сверхэкспрессия

Анализ промотора

Сверхэкспрессия

VpGLOX

VpPR10.2

VpSTS

VpPR10.1

Гуань и др. . (2011)

He и др. . (2013)

Сюй и др. . (2010)

Сюй и др. . (2014)

Листья

Гренаш

Сира

GV2260

GV3101

Инженерия вирусных векторов

Сверхэкспрессия

кДНК GLRaV ‐ 2

VvNPR1

Лю и др. .(2009)

Le Henanff et al . (2009)

Агро-полив

Корни проростков in vitro проростков

Prime, без косточек по Томпсону

Prime

EHA105

EHA105

Инженерия вирусных векторов

Инжиниринг вирусных векторов

кДНК GRSPaV

кДНК GVA

Менг и др. .(2013)

Муруганантам и др. . (2009)

Совместное культивирование

Клеточная суспензия

Гаме красный

EHA105

Анализ промотора

VvDFR

Голлоп и др. . (2002)

Соматические зародыши

Шардоне

Томпсон без косточек

GV3101

EHA105

Проверка Ami ‐ РНК (котрансформация)

Тестирование промоторов

амиРНК против вируса фанлиста виноградной лозы и сенсор GUS CaMV35S, CsVMV,

At промоторы ACT2

Jelly и др. .(2012)

Ли и др. . (2001)

Thompson без косточек

EHA105

Тестирование промотора

BDDP с промоторами и энхансерами CaMV35S, CsVMV

Ли и др. . (2004; Li et al ., 2011)

31 промотор винограда

Ли и др. .(2012)

Свобода

EHA105

Сверхэкспрессия

VvCBF4

Tillet et al. (2012)

41B

EHA105

Сверхэкспрессия

VvSK1

VvCEB1

VvABF2

Lecourieux et al. (2010)

Николас и др. (2013)

Николас et al. (2014)

Chardonnay, Thompson без косточек

EHA101

Сверхэкспрессия

Груша PGIP

Agüero et al. (2015)

Thompson без косточек

GV3101

Сверхэкспрессия

VpSTS

VpPUB23

Вентилятор et al. (2008)

Zhou et al. (2014)

Неэмбриональные культуры клеток также можно стабильно трансформировать с помощью Agrobacterium . Было показано, что это особенно интересно для производства биологически активных соединений (Martínez-Márquez et al. , 2015). Для повышения эффективности трансформации, опосредованной Agrobacterium дедифференцированных клеток V. vinifera cv Monastrell, Chu et al. (2016) использовал метод трансформации, опосредованной Agrobacterium с помощью ультразвуковой обработки (SAAT), который ранее был разработан для трансформации сои (Trick and Finer, 1997). Этот метод значительно увеличивает эффективность трансформации (Chialva et al. , 2016).

Методы временной трансформации Для быстрого исследования неизвестной функции гена было разработано несколько систем временной трансформации. Эти анализы являются более быстрой и удобной альтернативой трудоемкому методу стабильной трансформации.В основном они включают опосредованную Agrobacterium временную трансформацию и прямой перенос генов путем биолистической бомбардировки, электропорации или трансфекции протопластов. Янссен и Гарднер (1990) показали, что короткий период совместного культивирования с A. tumefaciens приводит к активной транскрипции многих копий трансгена в клетках мезофилла. В виноградной лозе эта технология была успешно использована для мониторинга изменений кальция, вызванных элиситором, за счет сверхэкспрессии апоэкворина в V.vinifera cv. Клетки Гаме (Vandelle и др. , 2006; Азиз и др. , 2007). Существуют и другие методы: i) A. tumefaciens можно внедрить в листья растений с помощью безыгольного шприца для введения суспензии Agrobacterium через устьица (Zottini et al. , 2008) или ii) листья (или целые растение) можно залить суспензией бактерий под вакуумом для облегчения проникновения жидкости в клетки. Преимущество этого второго метода заключается в том, что он позволяет экспрессировать гены во всем листе (или растении).В ряде исследований сообщалось об успешном использовании экспериментов по вакуумной инфильтрации либо с отделенными листьями (Santos-Rosa et al. , 2008; Zottini et al. , 2008; Le Henanff et al. , 2009; Xu). и др. , 2010; Guan и др. , 2011; Bertazzon и др. , 2012; He и др. , 2013; Xu и др. , 2014) или целыми растениями (Kurth и др., , 2012; Visser и др., , 2012). Было показано, что успех экспериментов по агроинфильтрации зависит от сорта (Santos-Rosa et al., 2008 г.).

Для некоторых частных случаев были разработаны другие методы. Метод агродренчинга был разработан с использованием корней молодых проростков виноградной лозы in vitro для доставки инфекционного вирусного клона кДНК GVA, который нельзя было инокулировать с помощью агроинфильтрации листьев (Muruganantham et al. , 2009). Этот метод был одобрен для бессемянных сортов винограда Prime и Thompson (Muruganantham et al. , 2009; Meng et al., 2013). Поскольку производство трансгенных фруктов после трансформации виноградной лозы требует времени, была разработана агроинъекция ягод, чтобы сократить время, необходимое для изучения функции генов в фруктах. Этот метод является производным от временной методологии, успешно примененной к плодам томата (Orzaez et al. , 2006), основанной на инъекции культур Agrobacterium через верхушку стебля плода с помощью шприца с иглой. Используя эту технику временной сверхэкспрессии в виноградных плодах «Kyoho», Gao et al. (2018) показали участие рецептора ABA VlPYL1 в регуляции накопления антоцианов в кожуре ягод винограда. Аналогичным образом Sun et al. (2017) показали, что сверхэкспрессия VvVHP1; 2 ( вакуолярной H + -PPase 1 ) способствует накоплению антоцианов в кожуре ягод. Эти отчеты подчеркивают возможное применение техники временной сверхэкспрессии для изучения развития плодов виноградной лозы.

4. Технологии на основе вирусов

Альтернативным подходом к функциональным исследованиям винограда является использование вирусных переносчиков (, таблица 5, ).В течение долгого времени модифицированные вирусы растений использовались для нескольких целей, включая временную экспрессию гетерологичных белков (с ограничениями размера белка в соответствии с используемой вирусной системой) или подавление генов хозяина (известное как подавление индуцированного вирусом гена или VIGS).

Таблица 5. Возможные векторы на основе вирусов растений, подходящие для VIGS в виноградной лозе.

Вирус

Тип / род вируса

Агроинок.вирусного вектора

Инфекция /
Рекомб. вирус

V. vinifera сорта

Репортерный ген

Расшифровка VIGS

Номер ссылки

Вирус виноградной лозы A (GVA)

РНК / Витивирус

Агрообработка корней

Да / уходит

Prime

GFP

PDS глушитель

Муруганантам
и др. (2009)

Вирус-2, связанный с листьями виноградной лозы
(GLRa-V2)

РНК / Клостеровирус

Вакуумная агроинфильтрация
целых проростков

Да / уходит

Заражение Syrah
и Cab. Франк.

GFP и GUS

PDS и ChlI глушитель

Лю et al. (2009)
Курт и др. (2012)

Grapevine rupestris стебель питтинг-ассоциированный. вирус (GRSPaV)

РНК / Foveavirus

Агро-полив
корней проростков

Да / Корни

Прайм Томсон

GFP

nd

Meng et al. (2013)

Алжирский латентный вирус виноградной лозы (GALV)

РНК / Tombusvirus

Вакуумная агроинфильтрация
проростков

Да / оставляет

Сира

GFP
(с использованием N. benthamania)

ChlH
(с использованием Н.бентамания )

Lovato et al. (2014)
Park et al. (2016)

Бракетто

Неббиоло

Султана

Корвина

Для VIGS требуются сконструированные инфекционные вирусные клоны, которые генерируют двухцепочечную РНК, приводящую к посттранскрипционному молчанию целевого гена как части собственного защитного ответа растения против вторгающегося вируса (Baulcombe, 1999).VIGS — один из наиболее широко используемых геномных инструментов, демонстрирующий несколько преимуществ, таких как возможность простого и быстрого подавления гена без необходимости стабильной трансформации растений, а также возможность прямого и обратного генетических подходов для многих видов сельскохозяйственных культур (Сентил-Кумар и Майсур, 2011). VIGS успешно использовался для более точного определения роли генов, участвующих в различных процессах растений, включая развитие плодов (Fernandez-Moreno et al. , 2013) или устойчивость к абиотическому стрессу (Ramegowda et al., 2014).

Большинство доступных векторов на основе вирусов растений демонстрируют диапазон хозяев, в основном ограниченный однолетними или травянистыми растениями. В этом контексте было сконструировано несколько инфекционных вирусных векторов виноградной лозы, в том числе на основе вируса Vitivirus Grapevine Virus A (GVA) (Muruganantham et al. , 2009), Closterovirus Grapevine leafroll-associated virus-2 (GLRaV -2) (Kurth et al. , 2012), и вирус Foveavirus Grapevine rupestris, связанный со стеблевой ямкой (GRSPaV) (Meng et al., 2013). Генерация рекомбинантных GFP-экспрессирующих клонов вирусной кДНК, вставленных в бинарные плазмиды, позволила провести агроинокуляцию различных сортов винограда и подчеркнула инфекционность этих вирусных конструкций с помощью визуализации GFP. Через четыре недели после агроинокуляции вирус был обнаружен в инфицированных V. vinifera проростках независимо от используемого вектора вирусного происхождения. Флуоресцентные сигналы GVA-GFP и GRSPaV-GFP были обнаружены в листьях и корнях проростков соответственно (Muruganantham et al., 2009 г .; Meng et al. , 2013). В случае GLRaV-2 инфицированные клетки сначала появлялись во флоэме ствола, а затем колонизировали все органы растения, включая ягоды, таким образом обнаруживая системную экспрессию вируса, распространяющуюся по флоэме. Интересно, что вирусная инфекция, происходящая от вектора GLRaV-2, передается путем прививки к широкому спектру сортов винограда и является генетически высокостабильной в инфицированных растениях, которые экспрессируют экзогенную передаваемую последовательность в течение 3 лет после инокуляции (Доля и Кунин, 2013).Эффективность подавления транскрипционного гена, опосредованного GVA и GLRaV-2, была продемонстрирована с использованием производных векторов, несущих фрагменты генов-мишеней-хозяев. Таким образом, индуцированное вирусом подавление эндогенного PDS ( фитоен-десатураза ) или ChlI ( субъединица I хелатазы магния-протопорфирина IX) наблюдалось на инфицированных виноградных лозах, проявляя симптомы обесцвечивания листьев в результате потери хлорофилла (( Муруганантам и др. , 2009 г .; Курт и др., 2012). Способность таких векторов вируса виноградной лозы заглушать гены в определенных органах (например, корнях и ягодах) или в определенных тканях (например, кожуре плодов) остается открытым вопросом.

Эта проблема может объяснить, по крайней мере частично, отсутствие функциональных исследований с использованием этих инфекционных вирусных векторов винограда. Другие вирусные векторы, такие как вирус погремушки табака ( TRV ) и скрытый сферический вирус Apple ( ASLV ) векторы могут вызывать VIGS у многих видов растений (Senthil-Kumar and Mysore, 2011), но не у виноградной лозы, как недавно подтверждено Gao et al. (2018), которому не удалось заставить замолчать VlPYL1 ( устойчивость к пирабактину, / PYL ( PYR-подобный )) с помощью TRV-опосредованного подавления в винограде сорта «Киохо». Насколько нам известно, только один вектор вирусного происхождения был успешно использован для проведения функциональных исследований на виноградной лозе. В 2007 году Перец и его сотрудники разработали систему IL-60, полученную на основе геминивируса , вируса желтого скручивания листьев томатов (TYLCV). IL-60 был определен как универсальная система векторов ДНК растений, обеспечивающая эффективную экспрессию или подавление звука у многих видов растений (Peretz et al., 2007). Десять лет спустя Sun et al. (2017) успешно использовал систему временной экспрессии вируса IL-60 для сверхэкспрессии VvVHP1 (вакуолярная H + -PPase 1) в ягодах «Kyoho». Тем не менее, эффективность системы IL-60 в заглушении виноградных генов еще предстоит продемонстрировать.

Недавно вирусные векторы были разработаны как многообещающие инструменты для инженерии генома растений, включая использование редактирования генома (Zaidi and Mansoor, 2017). Эффективность нацеливания на ген (GT) зависит от способа доставки реагентов GT (нуклеаз, специфичных для последовательности и репарационных матриц) в растительные клетки.Таким образом, автономно реплицирующиеся векторы на основе вирусов были продемонстрированы как эффективные средства доставки реагентов GT в растения. РНК-вирусы растений, такие как вирус картофеля X (PVX) и вирус табачной погремушки (TRV), использовали для доставки нуклеаз ZFN (Marton et al. , 2010) или направляющих РНК CRISPR (gRNA) (Ali и др. , 2015). Используя систему CRISPR-Cas в сочетании с репликоном «катящегося круга» вируса желтого карлика бобов (BEyDV), Dahan-Meir et al. (2018) оптимизировал метод нацеливания на мутагенез и замену генов в томате без каких-либо маркеров селекции или репортерных генов. Одиночная вирусная конструкция, описанная в этом исследовании, содержит как CRISPR-Cas9, так и систему геминивирусных репликонов, а также направляющую РНК и донорский фрагмент, которые можно обменивать модульным способом. Это делает настоящий вирусный вектор интересным инструментом, который потенциально может быть адаптирован к виноградной лозе.

Редактирование генома

Термин «Новые селекционные технологии (НСП)» включает несколько методов, имеющих разные цели и методологии.Наиболее известным и способным допускать точные генетические изменения является редактирование генома. Применение программируемых нуклеаз для редактирования генома стало одним из величайших научных достижений в области генной инженерии растений (Kim and Kim, 2014). Эти нуклеазы представляют собой ферменты, которые разрезают ДНК в определенных желаемых участках генома. Затем индуцированные двухцепочечные разрывы (DSB) репарируются с помощью механизма естественной репарации клетки, либо негомологичного соединения концов (NHEJ), которое может вносить вариации нуклеотидов, либо гомологичной рекомбинации (HDR), когда присутствует донорская ДНК с гомологичными плечами.Основными достижимыми результатами являются нокаут или замена гена ( Рисунок 3 ).

1. Современное состояние НБЦ

За последние 15 лет использовались три основных класса программируемых нуклеаз для точного редактирования генома: нуклеазы цинковых пальцев (ZFN), эффекторные нуклеазы, подобные активаторам транскрипции (TALEN), и регулярно сгруппированные короткие палиндромные повторы (CRISPR) с ассоциированными нуклеаза Cas9. Система CRISPR / Cas9 является наиболее мощным доступным сейчас методом редактирования генов благодаря простоте применения и эффективности (Puchta and Fauser, 2014).Технология CRISPR / Cas9, первоначально обнаруженная как часть адаптивного иммунитета у Streptococcus pyogenes , использовалась для введения желаемых мутаций в гены, представляющие интерес, в медицинских исследованиях, исследованиях растений и животных. Он действует посредством направляющих РНК, состоящих из спейсера, комплементарного желаемой последовательности ДНК, и каркасного комплекса с Cas9 (van der Oost et al. , 2014). Комплекс Cas9 / guide RNA сканирует геном в поисках комплементарности, раскручивая двухцепочечную ДНК.Процесс раскручивания, являющийся предпосылкой для проверки и поиска комплементарного целевого сайта, разрешается мотивом, примыкающим к протоспейсеру (PAM), распознаваемым нуклеазой. Как только подходящая мишень найдена, нуклеаза может генерировать DSB с эффектом введения инсерционных / делеционных (INDEL) мутаций в конкретную последовательность гена. В недавней статье Jones et al. (2017) оценили кинетику нуклеазы Cas9, измерив временные рамки, необходимые для раскручивания двухцепочечной ДНК и для проверки комплементарности направляющей РНК в живых E.coli . Они обнаружили, что каждая потенциальная цель — каждая область с сайтом PAM (для SpCas9 — это триплет NGG) — связана менее чем за 30 миллисекунд, что позволяет найти конкретную единственную целевую последовательность примерно за шесть часов.

Рисунок 3. Схема, показывающая функционирование нуклеазы CRISPR-Cas9. PAM = мотив, прилегающий к протоспейсеру; NHEJ = негомологичное соединение концов; HDR = гомологически направленное восстановление.

Применение этих новых технологий может быть особенно полезно при выращивании винограда, поскольку они производят минимальные и точные модификации в выбранных генотипах, представляющих интерес, таких как элитные сорта, востребованные винным рынком, без изменения генетического фона, как это происходит в традиционной селекции.Технология CRISPR / Cas9 успешно применялась для создания отредактированных растений виноградной лозы (Osakabe et al. , 2018). Были использованы две разные системы доставки: одна основана на стабильной интеграции генетических компонентов в геном посредством переноса гена A. tumefaciens , а вторая основана на прямой доставке очищенного белка Cas9 и гРНК (, рис. ). Ren et al. (2016) трансформировал массы эмбриогенных клеток «Шардоне» для получения точечных мутаций в гене L-идонатдегидрогеназы.Они смогли регенерировать растения с измененной выработкой винной кислоты и витамина C. В 2017 году соматические зародыши Neo Muscat были трансформированы с помощью редактирующей конструкции CRISPR / Cas9, нацеленной на ген фитоен-десатуразы, и были получены растения с листьями-альбиносами (Nakajima ). и др., , 2017). Трансгенные растения Thompson Seedless также недавно были получены с мутированными версиями гена фактора транскрипции WRKY52 как в моно-, так и в биаллельных условиях (Wang et al., 2018). Пытаясь получить нетрансгенные отредактированные виноградные лозы, Малой и его коллеги (2016) напрямую доставили очищенные Cas9 и gRNA в протопласты «Шардоне», генерируя отредактированные протопласты, но не целые растения. Однако доля протопластов, представляющих мутации, была относительно низкой, около 0,5%.

Рис. 4. Текущие варианты редактирования генома виноградной лозы с использованием нуклеазы CRISPR-Cas9.

2.Технические проблемы для NBT

Основными проблемами, ограничивающими потенциал обычно используемого S. pyogenes Cas9, являются: i) возникновение нецелевого редактирования, которое крайне нежелательно, ii) потребность в специфическом сайте PAM (NGG), примыкающем к целевому сайту. что ограничивает количество потенциальных мишеней и iii) большой размер нуклеазы (приблизительно 160 кДа), который может препятствовать доставке редактирующего механизма через комплексы эндонуклеаз или вирусные частицы.Соответственно, технологические усовершенствования SpCas9 были сосредоточены на трех основных целях: повышение точности и специфичности нацеливания, расширение набора сайтов PAM, распознаваемых нуклеазой, и уменьшение размера молекулы. В настоящее время многие варианты Cas, более специфичные, точные и способные распознавать различные последовательности PAM, были получены путем мутагенизации ключевых аминокислот SpCas9. Кроме того, несколько ортологов SpCas9 были обнаружены у других видов бактерий, которые демонстрируют другую специфичность сайта PAM и меньший размер (Cebrian-Serrano and Davies, 2017).

Еще одно направление исследований — усовершенствование методологии доставки оборудования CRISPR / Cas в клетки растений. Это важное направление исследований, поскольку наличие методов, позволяющих избежать включения чужеродной ДНК в геном хозяина, может иметь решающее значение для того, чтобы подготовить почву для исключения продуктов редактирования генома из-под действия законодательства о ГМО. Последние разработки и методы в области редактирования генома без использования ДНК кратко изложены в Metje-Sprink et al. (2019), и они в основном полагаются на доставку комплекса белок-РНК (RNP) к протопластам посредством электропорации, везикул полиэтиленгликоля (PEG), биолистики (см. Параграф 4.2). Основными недостатками этих подходов по сравнению с классической системой трансформации на основе A. tumefaciens являются низкая эффективность редактирования, отсутствие фазы отбора для обогащения для положительно отредактированных растений и необходимость секвенирования для скрининга. С другой стороны, при использовании классической трансформации, опосредованной Agrobacterium , оцениваются новые подходы к устранению экзогенной ДНК. У винограда, если геном сорта должен быть сохранен, обратное скрещивание и скрининг потомства не являются осуществимой стратегией, и следует рассмотреть и протестировать методы сайт-специфической элиминации кассеты ДНК (Dalla Costa et al., 2019).

Будущие перспективы генетического улучшения виноградной лозы с помощью системы CRISPR / Cas могут касаться оптимизации целенаправленной вставки донорской ДНК в сайт расщепления на основе гомологии (стратегия knock-in). В настоящее время метод «нокаута» остается очень сложным по сравнению с «нокаутом» гена (нуклеотидные мутации в сайте-мишени расщепления), но он может быть очень полезен для целевой вставки гена или замены аллеля. Донорская ДНК может содержать аллельный вариант с утратой или усилением функции по сравнению с целевым аллелем или может быть геном, происходящим от диких родственников, который может придавать специфическую устойчивость к патогенам.Визуальной целью является внедрение в элитные сорта нескольких генов устойчивости к болезням или полигенных качественных признаков, а также модуляция важных метаболических путей за счет одновременного использования нескольких направляющих РНК и нескольких донорских ДНК, но эта амбициозная цель потребует длительного времени и значительного технологического прогресса. . Наконец, технология CRISPR / Cas может также использоваться для получения генетической изменчивости для изучения биологии растений и для получения новых аллельных вариантов с агрономическими / качественными преимуществами.

Нормативно-правовая база и перспективы НБТ

Развитие технологий редактирования генома может снизить затраты и время, необходимые для улучшения агрономических, а также садовых культур в будущем, но широкое внедрение NBT требует государственной поддержки в создании обновленной нормативной базы (Ma et al. , 2018 ). Национальная политика в отношении продуктов НБТ для кормов и продуктов питания, вероятно, будет играть ключевую роль в определении их успеха в обозримом будущем.Можно наблюдать два противоположных отношения к зеленым биотехнологиям: одно сосредоточено на конечном продукте, а другое уделяет больше внимания процессу, посредством которого был произведен конкретный продукт. Первому подходу следуют США, Аргентина, Австралия и Бразилия, которые установили, что, если в разновидности, отредактированной геномом, нет чужеродных генов или генетического материала, то он не будет подвергаться дополнительному регулирующему надзору и оценке риска, как в случае ГМО (Eriksson et al., 2019). Второй подход исторически был принят в Европе, где 25 июля 2018 года Суд Европейского Союза постановил, что организмы, полученные путем мутагенеза (включая редактирование генома), являются ГМО в рамках Европейской директивы по ГМО 2001/18 /. EC ( http://curia.europa.eu/juris/document/document.jsf?text=&docid=204387&pageIndex=0&doclang=EN&mode=req&dir=&occ=first&part=1&cid=747443 ). Это решение решительно подтверждает принцип предосторожности и вынуждает генно-редактируемые растения с небольшими целевыми модификациями нуклеотидов проходить очень долгий и дорогостоящий процесс регулирования, предназначенный для классических трансгенных растений и определенный Регламентами (ЕС) 1829/2003 и (ЕС) 1830. / 2003.Эта нормативно-правовая база в основном опирается на оценку безопасности в соответствии с высочайшими стандартами, полную прослеживаемость по всей производственной / сбытовой цепочке и требования к маркировке (, таблица 6, ).

Важным моментом является потребность в аналитическом методе однозначной идентификации конкретного генетически модифицированного организма. В случае организмов с редактированием генома нуклеотидные мутации, вызванные механизмом редактирования генов, могут быть неотличимы от встречающихся в природе (или вызванных химическим путем или облучением) с помощью современных доступных аналитических методов (Grohmann et al., 2019). Отсюда следует, что метод, позволяющий однозначно отследить происхождение этой мутации, не может быть предоставлен, поскольку нельзя исключить, что идентичные изменения ДНК произошли уже спонтанно, были внесены случайным мутагенезом или были / будут созданы в независимом эксперименте по редактированию. Эта неопределенность будет иметь последствия для соблюдения законодательства о ГМО (ENGL, 2019).

Таблица 6. Основные принципы, лежащие в основе европейского законодательства о ГМО.

Принцип

Законодательный акт

Требование

Авторизация

Реж. 2001/18 / EC
Рег. (EC) № 1829/2003
Dir. (ЕС) 2015/412

Заявитель должен подать запрос на разрешение ГМО в государство-член, которое передаст его в EFSA (Европейское управление по безопасности пищевых продуктов) для оценки риска.Заключение EFSA будет передано Европейской комиссии для принятия окончательного решения. Разрешения действительны не более 10 лет (с возможностью продления).
Государства-члены имеют возможность ограничить или запретить выращивание ГМО на своей территории

Прослеживаемость

Рег. (ЕС) № 1830/2003

ГМО и продукты, произведенные из ГМО, необходимо отслеживать на всех этапах их размещения на рынке.Информация «продукт / ингредиент состоит из ГМО, содержит или произведен из них» должна быть передана всем операторам, получающим продукт по цепочкам производства и распределения.
Информация о ГМО должна быть внесена в общедоступный регистр

Маркировка

Рег. (ЕС) № 1829/2003
Рег. (ЕС) № 1830/2003

Специальная маркировка продукта требуется, если GM-материал> 0.9% пищевого ингредиента / кормового материала при маркировке не является обязательным, если ГМ-материал ≤ 0,9%, при условии, что это присутствие является случайным или технически неизбежным

Научное сообщество (по инициативе VIB, научно-исследовательского института биологических наук, базирующегося в Бельгии) выразило свое несогласие с постановлением Суда о защите редактирования генома от законодательства о ГМО. Сотни европейских исследовательских центров (университетов, государственных и частных институтов) подписали важное письмо, которое было направлено президенту Европейской комиссии Жан-Клоду Юнкеру 24 января 2019 года ( www.vib.be/en/news/Documents/Position%20paper%20on%20the%20ECJ%20ruling%20on%20CRISPR%2012%20Nov%202018.pdf ). В этом документе ученые утверждают, что регулирование редактирования генома как ГМО будет иметь негативные последствия для сельского хозяйства, общества и экономики в Европе, и надеются, что организмы, содержащие небольшие генетические изменения и не содержащие чужеродных генов, не будут подпадать под действие положений ЕС по ГМО. Директива, но вместо этого подпадет под режим регулирования, который применяется к классическим сортам.По наблюдениям Tyczewska et al. (2018) ЕС понес большие инвестиционные затраты в исследованиях, а также в НБТ, которые должны способствовать повышению конкурентоспособности европейского сельского хозяйства. Огромное развитие аналитических инструментов за последние годы, вероятно, могло бы помочь выйти из манихейской обличительной речи «продукт против процесса». В настоящее время у нас есть технологии и знания, чтобы глубоко оценить растение, наделенное новым признаком, как на фенотипическом, так и на геномном уровне. Что касается этого последнего аспекта, платформы для секвенирования следующего поколения (NGS) и биоинформатика могут сделать возможным секвенирование всего генома в короткие сроки и с низкими затратами, позволяя выбрать подходящий и более безопасный растительный материал для размножения и коммерциализации.Такие научные данные должны направлять действия политиков и регулирующих органов по повышению ценности инноваций на благо общества.

Заключение — Какие перспективы у биотехнологий виноградной лозы и НБЦ

Биотехнологии охватывают очень большое количество приложений для размножения или улучшения санитарных или генетических сортов винограда. Некоторые из этих технологий теперь настолько интегрированы в селекцию подвоей и разновидностей привоя, что больше не являются предметом споров. Таким образом, без использования культуры апекса или микротрансплантации, которые делают возможным устранение патогенных вирусов или бактерий, невозможно обеспечить промышленность здоровым клональным материалом.Напоминаем, что 100% подвоей, распространяемых во Франции, представляют собой сертифицированные клоны, большинство из которых были продезинфицированы с помощью термотерапии и микропрививки. Это также верно для значительной части клонов привоя. Что касается сортовых инноваций, использование спасения эмбрионов широко распространено в селекции бессемянного столового винограда, что привело к появлению очень инновационного диапазона сортов.

Новейшие биотехнологии, генетическая трансформация, разработанная в 1990-х годах, и редактирование генома, все еще находящееся в стадии разработки, позволяют осуществлять целенаправленные модификации генома.Эти технологии, которые были проверены в исследованиях функциональной геномики, все еще рассматриваются для селекции лишь в предварительном порядке, тогда как это единственно возможный подход для сохранения идентичности и агрономических характеристик разновидностей, столь дорогих для отрасли. Первая проблема касается традиционного имиджа, который виноделы привязывают к своей деятельности, — понятие, которое не очень совместимо с инновационными сортами в целом и с НБТ в частности. Другой причиной, ограничивающей использование NBT для генетического улучшения, является сложность архитектуры некоторых агрономических признаков (рост растений, урожайность, состав плодов…). Более того, исследования реакции винограда на абиотические ограничения показали, что признаки адаптации (устойчивость к температуре, эффективность использования воды …) определяются несколькими локусами количественных признаков (QTL), каждый QTL объясняет только часть фенотипической изменчивости в комплексе. сеть генетического взаимодействия. Несмотря на то, что несколько вариантов применения можно рассматривать в отношении признаков качества плодов, регулируемых основными QTL (например, вариации кожуры ягод, бессемянность), текущий потенциал NBT остается ограниченным.

Фактически, первым многообещающим вкладом NBT в селекцию будет манипулирование толерантностью к болезням, поскольку некоторые из этих признаков уже подвергаются пирамидному отбору посредством селекции с помощью маркеров. Однако, хотя некоторые генетические маркеры картируют QTL устойчивости к основным заболеваниям, большинство причинно-следственных генетических последовательностей и их функционирования не идентифицированы. Более того, очень мало известно о второстепенных характеристиках устойчивости к болезням, хотя они могут играть решающую роль в устойчивости устойчивости.Наконец, поскольку V. vinifera чувствительна к целому ряду грибов, создание мультирезистентного генотипа все еще будет довольно сложным.

Таким образом, для селекции сортов винограда, способных как ограничивать вводимые ресурсы (пестициды, вода, минералы), так и справляться с изменениями климата и абиотическими стрессами, НБТ потребуются значительный технический прогресс и генетические знания для замены или дополнения классических подходов к селекции.

НЕОГРАНИЧЕННАЯ КНИЖНАЯ БИБЛИОТЕКА

Неограниченная библиотека книг


Присоединяйтесь к сотням тысяч довольных участников, которые раньше проводили бесчисленные часы в поисках медиа и контента в Интернете, а теперь наслаждаются самыми популярными новыми книгами, журналами и комиксами в неограниченной библиотеке книг. Это ЗДЕСЬ и БЕСПЛАТНО. Вот почему вам стоит присоединиться:

Неограниченное количество книг, журналов и комиксов где бы вы ни находились: прямо в браузере на ПК или планшете.

Более 10 миллионов наименований , охватывающих все вообразимые жанры, у вас под рукой.

Лучшие книги, журналы и комиксы во всех жанрах, включая боевик, приключения, аниме, мангу, детей и семью, классику, комедии, справочники, руководства, драму, иностранное, ужасы, музыку, романтику, научную фантастику, фэнтези , Спорт и многое другое. Новые игры добавляются каждый день! Нам нравится сохранять свежесть.

Все платформы. Полностью оптимизирован.

Узнайте, почему тысячи людей присоединяются каждый день.

Зарегистрируйтесь сейчас и наслаждайтесь неограниченными развлечениями!

Загрузки последних книг: